מיקרוסקופיה קונפוקלית לכל החיים של הקרנית

מיקרוסקופיה קונפוקלית של הקרנית היא אחת משיטות המחקר המודרניות; היא מאפשרת ניטור תוך-חיוני של הקרנית עם הדמיית רקמות ברמה התאית והמיקרו-מבנית.

שיטה זו, בשל התכנון המקורי של המיקרוסקופ וכושר הרזולוציה הגבוה שלו, מאפשרת הדמיה של רקמת קרנית חיה, מדידת עובי כל אחת משכבותיה והערכת מידת ההפרעות המורפולוגיות.

מטרת מיקרוסקופיה קונפוקלית של הקרנית

לאפיין את השינויים המורפולוגיים של הקרנית המתרחשים במחלות דלקתיות ודיסטרופיות שונות , וכן כתוצאה מהתערבויות כירורגיות וחשיפה ל-CL.

נתוני בדיקה מורפולוגית נחוצים כדי להעריך את חומרת התהליך הפתולוגי, את יעילות הטיפול ולקבוע את הטקטיקות של ניהול המטופל.

אינדיקציות להליך

• מחלות דלקתיות של הקרנית ( קרטיטיס ).
• מחלות דיסטרופיות של הקרנית ( קרטוקונוס, ניוון פוקס וכו').
• תסמונת העין היבשה.
• מצבים לאחר התערבויות כירורגיות בקרנית ( השתלת קרנית חודרת, ניתוחי קרטורפרקציה).
• מצבים הקשורים ללבישת עדשות מגע.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

הכנה

ניתן לבצע בדיקה זו ללא שימוש בחומרי הרדמה. טיפה של נוזל טבילה מונחת על עדשת האובייקטיב של המיקרוסקופ הקונפוקלי. פעולה זו מבטלת מגע ישיר של העדשה עם הקרנית וממזערת את הסיכון לנזק לאפיתל.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

טֶכנִיקָה מיקרוסקופיה קונפוקלית של הקרנית.

המחקר מתבצע באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי מדגם ConfoScan 4 (Nider) בהגדלה של פי 500. המכשיר מאפשר לבחון את הקרנית לכל עוביה.

גודל האזור הנבדק הוא 440×330 מיקרומטר, עובי שכבת הסריקה הוא 5 מיקרומטר. העדשה עם טיפת ג'ל מובאת לקרנית עד שהיא נוגעת בה ומותקנת כך שעובי שכבת הנוזל הטבול הוא 2 מ"מ. תכנון המכשיר מאפשר בדיקת הקרנית באזור המרכזי ובאזורים הפרה-מרכזיים שלה.

התוויות נגד

התווית נגד יחסית היא גירוי חמור בעיניים עקב תהליך דלקתי חריף.

[ 10 ], [ 11 ]

ביצועים רגילים

תמונה מורפולוגית תקינה של הקרנית

האפיתל הקדמי מורכב מ-5-6 שכבות של תאים. העובי הממוצע של כל האפיתל הוא כ-50 מיקרומטר. על פי המבנה המורפולוגי, נבדלות השכבות הבאות (מבפנים החוצה): תאים בסיסיים, תאים בצורת מרצע ותאים שטחיים.

• השכבה הפנימית ביותר (הבסיסית) מיוצגת על ידי תאים גליליים קטנים, צפופים ללא גרעין נראה לעין. גבולות התאים הבסיסיים ברורים ובהירים.
• השכבה האמצעית מורכבת מ-2-3 שכבות של תאים קוצניים (מכונפים) עם חדירות עמוקות שבתוכה משובצות גידולים של תאים שכנים. במיקרוסקופ, גבולות התאים ניתנים להבחנה בבירור, וייתכן שהגרעינים אינם מוגדרים או אינם ברורים.
• השכבה השטחית של האפיתל מיוצגת על ידי שכבה אחת או שתיים של תאים פוליגונליים בעלי גבולות ברורים וצפיפות הומוגנית. הגרעינים בדרך כלל בהירים יותר מהציטופלזמה, שבה ניתן להבחין גם בטבעת כהה פרינוקלרית.

בין תאי השכבה השטחית, נבדלים תאים כהים ותאים בהירים. רפלקטיביות מוגברת של תאי אפיתל מצביעה על ירידה בקצב חילוף החומרים שלהם ועל התחלת קילוף.

קרום באומן הוא מבנה שקוף שאינו מחזיר אור, ולכן בדרך כלל בלתי אפשרי לראותו באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית.

מקלעת העצב התת-בסיסית ממוקמת מתחת לקרום באומן. בדרך כלל, סיבי עצב מופיעים כפסים בהירים הנמשכים במקביל על רקע כהה, ונוגעים זה בזה. החזרה (רפלקטיביות) עשויה להיות לא אחידה לאורך הסיב.

הסטרומה הקרנית תופסת 80 עד 90% מעובי הקרנית ומורכבת מרכיבים תאיים וחוץ-תאיים. המרכיבים התאיים העיקריים של הסטרומה הם קרטוציטים; הם מהווים כ-5% מהנפח.

תמונה מיקרוסקופית טיפוסית של הסטרומה כוללת מספר גופים בהירים בצורת אליפסה לא סדירה (גרעיני קרטוציטים) הנמצאים בעובי של מטריצה שקופה בצבע אפור כהה או שחור. בדרך כלל, הדמיה של מבנים חוץ-תאיים אינה אפשרית בשל שקיפותם. ניתן לחלק את הסטרומה באופן מותנה לתת-שכבות: קדמית (הממוקמת ישירות מתחת לקרום באומן ומהווה 10% מעובי הסטרומה), קדמית-אמצעית, אמצעית ואחורית.

הצפיפות הממוצעת של קרטוציטים גבוהה יותר בסטרומה הקדמית, ויורדת בהדרגה לכיוון השכבות האחוריות. צפיפות תאי הסטרומה הקדמיים גבוהה כמעט פי שניים מזו של תאי הסטרומה האחוריים (אם צפיפות תאי הסטרומה הקדמיים נלקחת כ-100%, אז צפיפות תאי הסטרומה האחוריים תהיה כ-53.7%). בסטרומה הקדמית, לגרעיני הקרטוציטים יש צורה מעוגלת בצורת שעועית, בעוד שבסטרומה האחורית הם סגלגלים ומוארכים יותר.

גרעיני קרטוציטים עשויים להשתנות בבהירותם. היכולת השונה להחזיר אור תלויה במצבם המטבולי. תאים בהירים יותר נחשבים לקרטוציטים מופעלים ("תאי לחץ"), שפעילותם מכוונת לשמירה על ההומאוסטזיס הפנימי של הקרנית. בשדה הראייה הנורמלי ובשדה הראייה, נמצאים תאים מופעלים בודדים.

סיבי עצב בסטרומה הקדמית של הקרנית נראים כפסים הומוגניים בהירים, שלעתים קרובות יוצרים התפצלויות.

קרום דסמט בדרך כלל שקוף ואינו ניתן לזיהוי במיקרוסקופ קונפוקלי.

האפיתל האחורי הוא שכבה חד-תאית של תאים שטוחים משושים או מצולעים בעלי משטח בהיר אחיד על רקע גבולות בין-תאיים כהים וברורים.

למכשיר יש את היכולת לחשב באופן ידני או אוטומטי את צפיפות התאים, את שטחם ואת מקדם השונות שלהם.

שינויים פתולוגיים במבנה הקרנית

קרטוקונוס מאופיין בשינויים משמעותיים באפיתל הקדמי ובסטרומה של הקרנית.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]