מחקר אימונולוגי באורולוגיה

הקצאת אימונוגרמה לחולה אורולוגי פירושה שהרופא המטפל מניח נוכחות של הפרעות במערכת החיסונית. שכפל חיידקי, ויראלי, זיהומים פטרייתיים, תגובות אלרגיות, מחלות מערכתיות יכול להיות תסמינים של הפרעות אלה, אשר מאופיינים על ידי מספר תסמונות (זיהום, סרטן, אלרגיות, אוטואימוניות, לימפופרוליפרטיביות). למטופל אחד יש מספר תסמונות. לדוגמה, מחלות זיהומיות כרוניות (תסמונת זיהומיות) יכול לגרום לכשל חיסוני ובעלי נטייה יכול להתבטא כשל חיסוני למחלות זיהומיות וסרטן (תסמונת סרטן). נטייה לזיהומים יכולה להתרחש על רקע של חוסר חיסונים משני, שהתפתח כתוצאה ממחלה לימפופרוליפרטיבית, למשל, לוקמיה. במערכת החיסונית קיימות שלוש קבוצות עיקריות של שינויים פתולוגיים:

• חוסר הכמות הכמותי או הפונקציונלי של קשר זה או אחר של חסינות, המוביל לפיתוח של מצב החיסוני;
• פגיעה בהכרה של האנטיגן על ידי המערכת החיסונית, המוביל לפיתוח של תהליכים אוטואימוניים;
• hyperreactive או "מעוות" התגובה החיסונית, המתבטאת על ידי התפתחות של מחלות אלרגיות.

יש בדיקות (בדיקות של רמה 1) ו במוקדמות (בדיקות של 2 רמה) שיטות immunodiagnostics. לשעבר קיים כדי לתקן הפרות במערכת החיסונית, האחרון - להקים את המנגנונים הכרוכים ביישום שלהם לצורך חיסון נוסף.

B - קישור נייד של חסינות

שיטות הקרנה

• קביעת מספר יחסי ומוחלט של B-לימפוציטים באמצעות immunofluorescence או cytometry זרימה באמצעות נוגדנים חד שבטיים נגד אנטיגנים B-cell (CD19, CD20, שבה CD - מקבץ של בידול). התוכן B- לימפוציטים הוא נורמלי במבוגרים: 8-19% של המספר הכולל של לויקוציטים או 190-380 תאים / μl. הגדלת הריכוז של לימפוציטים מסוג B מתרחשת זיהומים אקוטיים וכרוניים חיידקים ופטריות, מחלה כבדה כרונית, מחלות רקמת חיבור מערכתיות, לוקמיה לימפוציטית כרונית, מיאלומה נפוצה.
• קביעת ריכוז של נוגדנים nespespetsificheskih (F, M, G, E) על ידי immunodiffusion רדיאלי יחיד, או nephelometry turbometrii, radioimmunoassay או immunoassay האנזים (EIA). נורמות למבוגרים: אימונוגלובולין (Ig) 0.9-4.5 גרם / ליטר. IgM 03-3.7 גרם / l. IgG 8.0-17 g / l. עלייה בריכוז של אימונוגלובולינים מתרחשת עם אותם תנאים פתולוגיים בהם גידול התוכן של לימפוציטים B מתרחשת. הקטנת הריכוז של נוגדנים נמצאת hypogammaglobulinemia מולד, גידולים של מערכת החיסון, סילוק של הטחול, אובדן חלבון, מחלות של הכליות או המעיים, הטיפול עם cytostatics ו immunodepreesantami.

ציון שיטות

• קביעת מחזורי החיסון בדם על ידי משקעים סלקטיביים ב polysilene glycol ואחריו בדיקות צפיפות ספקטרופוטומטרי (80-20 UE רגיל). גברת במחזור מתחמים חיסוניים אופייני עבור חיידקים, פטרייתי אקוטית, זיהומים ויראליים, אוטואימוניות, מחלות immunocomplex, מחלה בסרום, תגובות אלרגיות מסוג 3;
• קביעת אימונוגלובולינים ספציפיים בדם ביחס אנטיגנים חיידקים ווירוסים, חומצה דאוקסיריבונוקלאית (DNA) במחלות אוטואימוניות, זיהוי של הזרע (פוריות אוטואימוניות) ונוגדנים protivopochechnyh (pyelonephritis ו גלומרולונפריטיס) על ידי immunodiffusion רדיאלי או ELISA.
• קביעת נוגדנים נוגדי חמצון בזרע [MAR-test (תגובה מעורבת של antiglobulin)], הנורמה היא שלילית.
• קביעת ריכוז של אימונוגלובולינים בשתן לצורך אבחנה דיפרנציאלית בין pyelonephritis ו glomerulonephritis (סלקטיביות של proteinuria).
• קביעת IgE במיץ הערמונית לאבחון של אלרגיות prostatitis על ידי immunodiffusion רדיאלי או ELISA. 
• מחקר בתגובת blasttransformation תגובה של B לימפוציטים על mitogen B-cell (pokeweed mitogen עבור גירוי של תגובת blasttransformation של לימפוציט B בנוכחות לימפוציטים מסוג T), שבה ערך התקן של 95-100%.

T-cell הקישור של חסינות

שיטות הקרנה

• קביעת מספר היחסי והמוחלט של תגובת הלימפוציטים הבוגר CD3 T ידי immunofluorescence או לזרום cytofluorometry באמצעות נוגדנים חד שבטיים נגד SDZ. הנורמה למבוגרים היא 58-76% או 1100-1700 תאים / μl. צמצום מספר חסינות תא אינדיקטור כישלון T-לימפוציטים. זהו מאפיין של כמה חסרים חיסוניים המשני (כרונית זיהומים חיידקים ווירוסים: שחפת, תסמונת הכשל החיסוני הנרכש, סרטן, אי ספיקת כליות כרונית, טראומה, מתח, הזדקנות, תת תזונה, טיפול עם תרופות ציטוטוקסיות, קרינה מייננת). הגדלת מספר לימפוציטים מסוג T היא על רקע היפראקטיביות החיסונית או מחלות לימפופרוליפרטיביות. עם דלקת, מספר לימפוציטים T- מגביר תחילה, ולאחר מכן יורדת. היעדר ירידה ב- T- לימפוציטים מעיד על תהליך של תהליך דלקתי.
• הערכה של subpopulations של לימפוציטים.
  • קביעת מספר T-helpers (נוגדן אנטי CD4). בדרך כלל, 36-55% או 400-1100 תאים / μl. הגדלת מספר התאים הללו מתרחשת מחלה אוטואימונית, מחלת Waldenstrom, antitransplantatsionnogo ההפעלה החיסונית; ירידה במספר תאים-T מסייע מתרחשת חיידקים כרוניים, זיהומים נגיפיים, protozoal, שחפת, אֵידְס, ממאירויות, כוויות, טראומה, תת תזונה, הזדקנות, טיפול cytostatics, קרינה מייננת.
  • קביעת מספר T-suppressors (נוגדנים נוגדי CD4). בדרך כלל, 17-37% או 300-700 תאים / μl. עלייה במספר של מדכאי T מתרחשת באותם תנאים שבהם מספר ה- T-helpers פוחת, ואת הירידה שלהם באותם תנאים, כאשר התוכן של T- עוזרים עולה.
  • מדד immunungulatory CD4 / CD8, בנורמה 1,5-2,5. Hyperactivity בשיעורים יותר מ -2.5 (אלרגיות ומחלות אוטואימוניות); היפואקטיביות - פחות מ 1.0 (נטייה לזיהומים כרוניים). עם תחילתו של תהליך דלקתי, מדד immunoregulatory עולה, וכאשר זה שוכך, זה מנרמל.

ציון שיטות

• קביעת מספר הרוצחים הטבעיים (תאי NK) - אנטי CD16 ואנטי CD56 נוגדנים. הנורמה עבור 16 לימפוציטים CD הוא 6-26%, CD56 - 9-19%. הגדלת מספר תאי NK מתרחשת דחיית שתל, להקטין - ב זיהומים ויראליים, סרטן, חסרים חיסוניים ראשוניים ומשניים, כוויות, טראומה ולחץ, טיפול עם cytostatics ו קרינה מייננת. 
• קביעת מספר לימפוציטים T עם הקולטן עבור interleukin-2 (סמן הפעלה) - נוגדן אנטי CD25. הנורמה היא 10-15%. עלייה במספרם נצפתה במחלות אלרגיות, דחייה של השתלות, תגובה לאנטיגנים תלויי תימוס בתקופה החריפה של זיהום ראשוני, ירידה באותן מחלות שבהן מספר תאי ה- NK יורד.
• בחינת הביטוי של סמן ההפעלה - המולקולה histocompatibility של המעמד השני HLA-DR. ביטוי מוגבר מתרחשת בתהליכים דלקתיים, בחולים עם הפטיטיס C, מחלת צליאק, עגבת, זיהומים בדרכי הנשימה חריפה.
• הערכת אפופטוזיס של לימפוציטים. אינדיקציה המוכנה של אפופטוזיס הלימפוציטים ניתן לזהות על ידי הביטוי שלהם של המשטח Fas-קולטן (CD95) במיטוכונדריה ו BD-2 protooncogene. אפופטוזיס הוערך על ידי עיבוד הלימפוציטים שני צבעי ניאון: יודיד propidium, אשר נקשר שברי דנ"א Annexin Y, מחייב phosphatidylserine על קרום התא המופיעים אפופטוזיס מוקדם. הערכת התוצאות מבוצעת על cytofluorimeter זרימה. חישוב התוצאות מבוסס על היחס בין תאים מוכתמים בצבעים שונים. תאים בלא כתם הם תאי קיימא, קשורים רק עם Annexin ה- Y, - סימנים מוקדמים של אפופטוזיס, עם יודיד propidium ו Annexin לי - גילויים באיחור של אפופטוזיס, מכתימים רק יודיד propidium מציינים נימק.
• הערכה של התפשטות של לימפוציטים T במבחנה.
  • שינוי blastogenesis התא הוא תגובה של טרנספורמציה הפיצוץ של לימפוציטים. Leukocytes מודגרת עם כל mitogen של מקור הצמחים (lectins). נפוץ יותר phytohemagglutinin 72 שעות, ואז לעשות כתם, הכתם אותו לספור את מספר פיצוצים! מדד הגירוי הוא היחס בין אחוז התאים המומרים בניסוי (תרבות עם phytohemagglutinin) לאחוז התאים שהשתנו בשליטה (תרבות ללא phytohemagglutinin). התגובה של הפיצוץ- transformation של לימפוציטים ניתן להעריך על ידי הכללה של תווית רדיואקטיבית (ZN-thymdin) בתאים בתרבית, כמו סינתזה דנ"א גדל כאשר מחלקים תאים. הפרעות בתגובת השגשוג מתרחשות הן בחסרונות חיסונים ראשוניים והן משניים הקשורים לזיהומים, מחלות אונקולוגיות, אי ספיקת כליות והתערבויות כירורגיות.
  • הערכת מחקרים אלה, הביטוי של סמנים הפעלה (CD25, קולטן transferrin כדי - CD71) מולקולות ואת MHC class II HLA-DR, אשר נעדרים באופן משמעותי על נח לימפוציטים. T לימפוציטים מגורה עם phytohemagglutinin אחרי סמנים ההפעלה הביטוי 3 ימים נותחו על ידי immunofluorescence ישיר או עקיף, cytometry זרימה באמצעות נוגדנים חד שבטיים מופרש קולטנים.
  • מדידת כמות המתווכים מסונתז על ידי לימפוציטים מסוג T מופעל [אינטרלוקין (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, גמא-אינטרפרון, וכו '], על ידי radioimmunoassay או ELISA. חשוב במיוחד הוא הערכה של הריכוז של y- אינטרפרון ו- IL-4 כמו סמנים של TH ו Th2 ב supernatant של תרבויות מופעלות ובתוך התא. אם אפשר, זה שימושי כדי לקבוע את הביטוי של הגן עבור ציטוקין המקביל על ידי רמת חומצה ריבונוקלאית מטריקס בתא לייצר את עוצמת הביטוי של הקולטנים עבור ציטוקינים המתאימים.
    
• התגובה של עיכוב הגירה של לימפוציטים. רגיש T- לימפוציטים בתגובה עם הלימפוקין שחרור אנטיגן, כולל גורמים. מעכב את ההגירה של לימפוציטים. התופעה של עיכוב הוא ציין כאשר המיטוגנים הם הציג לתוך התרבות של תאים. הערכת מידת העכבה מאפשרת לשפוט את יכולתם של לימפוציטים לשחרר ציטוקינים. בדרך כלל, תדירות ההגירה, בהתאם המיטוגן הספציפי, הוא 20-80%.
• הערכה של cytotoxicity של תאים NK. לקבוע את היכולת של תאים רוצח טבעי להרוג תאים היעד של הקו erythromyeloid K-562. אם נבדקים ציטוטוקסיות תלויה נוגדנים, תאים היעד מצופה נוגדנים IgG משמשים. תאים היעד מסומנים עם 3H-uridine ו מודגרות עם תאים אפקטור. המוות של תאי המטרה מוערך משחרור התווית הרדיואקטיבית לתוך הפתרון. צמצום של cytotoxicity מתרחשת עם ממאיר neoplasms. במקרים מסוימים, כאשר נדרשת הערכה של היעילות של הטיפול עם אינטרלוקינים, cytotoxicity של תאים NK מוערך כאשר מודגרות עם ציטוקינים מסוימים.

חקירת הפונקציה של phagocytes

שיטות הקרנה

מחקר קליטת פגוציטים עוצם תא חיידקים (phagocytosis של חלקיקי לטקס, aureus תרבות מבחן, Escherichia coli, או מיקרואורגניזמים שבודדו המטופל). על ידי צנטריפוגה הדם heparinized, ההשעיה של leukocytes הוא מבודד, סרום של קבוצת הדם הרביעי הוא הוסיף עבור opsonization (opsonins הם חלבונים המשפרים phagocytosis). ההשעיה מיקרוביאלית הוא מדולל, מעורבב עם לויקוציטים מודגרת במשך 120 דקות, דגימה לניתוח לאחר 30.90.120 דקות לאחר תחילת הדגירה. של המתלים שנבחרו ליקויציטים לעשות כתמים. לקבוע את האינדיקטורים הבאים של phagocytosis:

• מדד phagocytic - אחוז התאים שנכנס phagocytosis ב 30 דקות ו 120 דקות הדגירה; (30) 94% מהמדד הפאגוציטי (120) - 92%;
• מספר phagocytic - המספר הממוצע של חיידקים כי הם תאיים; הערך הנורמטיבי של מספר phagocytic (30) 11%, מספר phagocytic (120) - 9.8%;  
• מקדם של מספר phagocytic - יחס של מספר phagocytic (30) כדי phagocytic מספר (120); 1.16 נורמלי;
• המדד של חיידקי נויטרופילים הוא היחס בין מספר החיידקים נהרג בתוך phagocytes למספר הכולל של חיידקים נלקח; בנורמה של 66%.

ציון שיטות

• חקירה של פעילות bactricidal של phagocytes במבחן עם nitrosine tetrazolium (NST) הוא מבחן NST. כדי leukocytes, צבע של חנקן tetrazolium צהוב נוסף. כאשר צבע נספג על ידי נויטרופיל, תהליך של הפחתת מתרחשת תחת פעולה של רדיקלים חופשיים של חמצן, וכתוצאה מכך מכתים כחול. התגובה מתבצעת בצלחת 96 שטוחה היטב. בשלוש הבארות הראשונות עם תערובת של HCT ו leukocytes, Hanks פתרון (ספונטנית HCT) מתווסף, האחרון - חלקיקי לטקס; דגירה על 37 מעלות צלזיוס במשך 25 דקות. התוצאות נקראות ב 540 ננומטר על הקורא לידי ביטוי ביחידות קונבנציונאלי. חישוב גורם גירוי (K _st ), שווה יחס של צפיפות אופטית בארות מגורה לצפיפות אופטי הממוצע בבארות ללא גירוי. באנשים בריאים, _{HCT ספונט} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1.78 ± 0.36.
• חקירת מולקולות הדבקה. בעזרת cytofluorimetry זרימה, הביטוי של אנטיגנים פני השטח CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 נקבע. חוסר חיסונים עם הפרה של הידבקות מתבטאים על ידי זיהומים חוזרים, ריפוי איטי של פצעים וחוסר מוגלה במוקדי הזיהום.

חקירת מערכת השלמה

שיטות הקרנה

קביעת פעילות hemolytic של השלמה - מחקר של המסלול הקלאסי של הפעלת משלים. דילולים שונים של הסרום של המטופל אדם בריא מתווספים אריתרוציטים של כבשים מצופה נוגדנים. יחידה של פעילות המוליטית נלקחת כהופך של דילול של נסיוב, שבו 50% של אריתרוציטים נהרסים. מידת המוליזה מוערכת photometrically על ידי התשואה של המוגלובין בפתרון. צמצום הפעילות המוליטית של השלמה נצפתה אצל זאבת מערכתית עם מעורבות כלייתית, גלומרולונפריטיס חריפה. אי-ספיקה של אי-ספיקת לב, מיאסטניה גרוויס, דלקת כבד ויראלית, לימפומות, עליה - עם צהבת חסימתית, תירואידיטיס השימוטו. דלקת מפרקים שגרונית, דלקת מפרקים שגרונית. Dermatomyositis, אוטם שריר הלב, קוליטיס ulcerative, תסמונת רייטר, צנית.

ציון שיטות

• קביעת רכיבים משלימים. קביעת כמותית מתבצעת על ידי השיטה של אימונודיפוזיה רדיאלי ו nephelometry.
  המחקר אינו אינפורמטיבי, אלא אם כן תכונות אנטיגניות של רכיבים משלימים משתנים.
• נמצא כי רכיב Clq של השלמה משפר phagocytosis ומתווך cytotoxicity הסלולר. הירידה שלה מתרחשת במחלות של מתחמי החיסון, זאבת מערכתית erythematosus, זיהומים purulent וגידולים.
• רכיב C3 משתתף בהפעלת מסלול ההשלמה הקלאסית והאלטרנטיבית. הפחתת הריכוז שלו קשורה לזיהומים חיידקיים פטרייתיים כרוניים, נוכחות של מתחמי חיסון במחזור או רקמות.
• רכיב C4 משתתף בהפעלת המסלול הקלאסי. הפחתת הריכוז שלו קשורה להפעלה ממושכת של משלים על ידי מתחמי החיסון וירידה בריכוז המעכב C1, השולט על הפעלת מסלול ההשלמה הקלאסית. מחסור ב- C4 מתרחש עם זאבת מערכתית, עלייה ב- C4 מתרחשת עם מחלת כליות, דחייה של השתלות, דלקת חריפה ומחלות במערכת העיכול.
• C5a הוא שבר קטן של המולקולה C5, להתפצל ממנו כתוצאה ההפעלה של מערכת השלמה. הגדלת הריכוז שלה מתרחשת עם דלקת, אלח דם, atopic ומחלות אלרגיות.
• Cl-inhibitor הוא גורם רב-תכליתי. הוא שולט על הפעלת רכיב C1 של השלמה, מעכב את הפעילות של kallikrein, plasmin ופעיל גורם Hagman, פרוטאזות Cls ו אור. מחסור של C1-inhibitor מוביל אנגיואדמה.
• מחקרים משלימים. לסרום הסטנדרטי חסר כל מרכיב משלים, סרום הבדיקה מתווסף הפעילות המוליטית של המשלים נקבע. אם הפעילות הממוליטית אינה משוחזרת לנורמה, היא האמינה כי הפעילות של רכיב משלים זה בסרום הבדיקה מצטמצם.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]