תאים גזעיים של הדם הטבורי של דם טבורי

דם קורדיאלי פועל כמקור לתאי גזע hematopoietic על פוטנציאל שגשוג ויכולות repopulation של תאים hematopoietic. הוכח שוב ושוב כי בזמן הלידה, הדם הטבורי מכיל מספר גדול מספיק של תאים בתאים hematopoietic גרוע. חלק מהמחברים מאמינים כי היתרון של השתלת תאי גזע hematopoietic של דם טבורי היא כי אין צורך לחפש תורם תואם אנטיגנים HLA. לדבריהם, חוסר בגרות של הגורמים במערכת החיסון של הילוד ירד הפעילות התפקודית של תאי מערכת חיסון תקינה, ולפיכך נמוך יותר בהשתלות מח עצם, את השכיחות של "שתל מול המארחת" תגובה חריפה. בשנת הישרדות השתלת תאי הזה של דם טבורי אינו נמוך מ תאי מח עצם, גם במקרה של שימוש במספר קטן יותר של GSK מנוהל לכל 1 ק"ג של משקל החולה. עם זאת, לדעתנו, את המספר האופטימלי של שאלות שתאים מושתלים דם טבורים הכרחיים engraftment היעיל בגוף של הנמען, תאימות אימונולוגיים שלהם, ומספר ההיבטים האחרים של השתלות של תאי גזע hematopoietic של חבל טבור דם דורש ניתוח רציני יותר.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

השגת תאי גזע hematopoietic של דם טבורי

נוהל קבלת תאי גזע hematopoietic של דם חבל הטבור דורש צריכת שלה מיד לאחר הלידה והפרדה שלה מן השליה, כאשר השליה ברחם או ברחם לשעבר, כמו גם עבור ניתוח קיסרי, אלא גם ברחם לשעבר. זה הוכיח כי במקרה של ירידה בזמן מלידה ההפרדה של התינוק מן השליה עד 30 שניות, את נפח הדם הטבורי המתקבל עולה בממוצע של 25-40 מ"ל. בהליך מאוחר יותר, כמות זהה של דם אובד. נקבע כי ההפרדה המוקדמת של הילד מן הצרבת אינה כרוכה בהשלכות שליליות על התינוק.

מכון מחקר רוסי להמטולוגיה עירוי דם פיתחה טכנולוגיה יעילה בעלות נמוכה עבור שניהם דם טבורי בבית שושלות פיזיולוגיים ((70.2 + 25.8 מ"ל)) ולניתוח קיסרי ((73.4 + 25.1) מ"ל). שיטה להפרדת דם חבל הטבור עם תשואה גבוהה מספיק של תאי mononuclear ו גרעיני - (83.1 + 9.6) ו- (83.4 + 14.1)%, בהתאמה. שיטה משופרת עבור cryopreservation של דם טבורי, אשר מבטיח בטיחות גבוהה של תאים mononuclear ו CFU-GM - (96,8 + 5,7) ו (89.6 + 22.6)%, בהתאמה. היעילות של שיטת ניקוז של דגימת דם טבורי באמצעות מיכל "קומפופלאסט 300" (רוסיה) נקבע. מחברי דם טבורי גדר בצעו מייד לאחר לידה והפרדה שלה מן השליה, במונחים של צבת השליה ברחם או ברחם לשעבר. לפני חוט הווריד חוט, חבל הטבור טופל פעם אחת עם תמיסת 5% של יוד, ולאחר מכן פעמיים עם אלכוהול 70% אתיל. הדם זרם דרך הצינורות המחברים אל המיכל באופן ספונטני. משך הגדר לא נמשך יותר מעשר דקות. 66 שיטת נפח ניקוז אספו דגימות דם טבורי ממוצעים (72 + 28) מ"ל, ומספר לויקוציטים במדגם ממוצעים מלא - (1.1 + 0.6) x x 107. ניתוח דם חבל הטבור על סטריליות (זיהום חיידקי, HIV-1 וירוסים של צהבת B ו- C, עגבת, ועל זיהום ציטומגלווירוס) רק מדגם אחד זוהו IgG-נוגדנים לצהבת C. במחקר אחר פעם השליה לאחר משטח העובר בלידה הונח על מסגרת מיוחדת כלפי מטה, כבל טופלה 5% נתרן יוד ו 75% אתיל אלכוהול ה. הוורידים של חבל הטבור רוקו בעזרת מחט ממערכת העירוי (G16). הדם רוקן לתוך המכל באופן ספונטני. נפח הדם נלקח בדרך זו בממוצע (55 + 25) מ"ל. העיתון G. Kogler ואח (1996) כבל נלקח הדם דרך סגורה וקיבלנו כמויות גדולות של דם - בממוצע (79 + 26) מ"ל. החוקרים מציינים כי בקרב 574 כבל דגימות דם מכילים כ 7% פחות מאשר 40 מ"ל של דם, אשר אינו מאפשר להשתמש בהם להשתלה. ק Isoyama ואח (1996), לוקח את דם טבורי על ידי exfusion פעיל באמצעות מזרקים, קיבלו בממוצע 69.1 מ"ל של דם (נפח דם טבורי נע בין 15 כדי 135 מ"ל). לבסוף, א עבדל Mageed משתפי פעולה PI (1997) על ידי צנתור וריד punovinnoy התקבלו בתוך 94 מ"ל הממוצע של דם טבורי (מ 56 כדי 143 מ"ל).

כדי להפחית את הסיכון של זיהום וזיהום iatrogenic ידי הפרשות אמהות מפותח אוסף דם במערכת סגורה המבוססת על מערכת transfuzioinoy בשימוש נרחב קורפ בריאות בקסטר, Deerfield, IL (USA), המכיל 62.5 מ"ל של CPDA (ציטראט-פוספט דקסטרוז עם אדנין) כמו נוגדי קרישה. הטכנולוגיה לייצור חומר הוא בעל חשיבות עליונה להכנת קרוב משפחה מדגם איכות לכמות התוכן וטוהר של השעיה התא. השיטות הקיימות של איסוף דם טבורים, kotoryeuslovno לסווג העדפת sleduetotdavat המערכת סגורה, חצי פתוחה הפתוחה ראשון, כמו מערכת סגורה מפחית באופן משמעותי את הסיכון של זיהום מיקרוביאלי של החומר, כמו גם זיהום של השעית התא של התא האם.

א 'נגלר ושותפיו (1998) ערכו ניתוח השוואתי של יעילותן של שלוש מערכות דגימת הדם הטבורי. בחלופה הראשונה, ההליך בוצע במערכת סגורה על ידי עירוי של דם ישירות לתוך המכולה. בגרסה השנייה, דם טבורי הושג על ידי השיטה של עירוי דם פעיל של מזרקים 1 עם שטיפה נוספת של הוורידים של השליה וניקוז סימולטני של דם לתוך המכולה (שיטה פתוחה). בגרסה השלישית, הדם נסגר במערכת פתוחה למחצה על ידי החילוץ אותו באופן פעיל עם מזרקים ושטיפה דרך עורק החבל הטבורי עם עירוי סימולטני לתוך המיכל. בגירסה הראשונה, המחברים קיבלו דם טבורי בנפח (76.4 + 32.1) מ"ל עם ספירת לויקוציטים (10.5 + 3.6) x 10 ⁶ לכל 1 מ"ל של דם. בגרסה השנייה, המדדים המקבילים היו (174.4 + 42.8) מ"ל ו (8.8 + 3.4) x 10 ⁶ / ml; ב - השלישי - (173.7 + 41.3) מ"ל ו (9.3 + 3.8) x 10 ⁶ / מ"ל. הזיהום השכיח ביותר של דגימות טבוריות דם טבורי צוין בעת שימוש במערכת פתוחה. מתאם ישיר בין מסה השליה לבין נפח הדם שחולץ הוא הוקם - עם הגדלת מסה שליה, כמות הדם שנאסף עולה.

לאחר איסוף דם טבורים ואחריו הפרדת צעד - בידוד תא mononuclear וטיהור מן השעית תא של אריתרוציטים. תחת תנאי הניסוי גרעיני תאים מבודדים ידי תמס כדורית methylcellulose שקיעה שלהם עם אמוניום כלוריד. עם זאת, לצורך קליני תאי מתיל יש להימנע בגלל ההפסד של 50-90% המושגת בה תאי גזע hematopoietic. Lysing תאי הדם האדומים בקשר עם כמויות גדולות של הפתרון עובד במרפאה גם בקושי ביצע, אולם אחוז ההפרדה באופן זה התאים בעלי הגרעין עם פנוטיפ של CD34 +, ו ובתאים פונקציות CFU-GM ו CFU-GEMM גבוה באופן משמעותי. סוכן חדש לבידוד של תאים mononuclear ב צפיפות שיפוע צבירה buyant פתרון (BDS72) כבר דיווח. חומר זה כולל את הפרמטרים הפיזיולוגיים הבאים: pH - 7.4, osmolality - 280 mosm / kg, צפיפות - 1.0720 g / ml. לדברי החוקרים, בעזרתו ניתן לבודד עד 100% של תאים CD34 חיובי ולהסיר 98% של כדוריות דם אדומות. עם זאת, המרפאה עדיין לא להחיל BDS72.

שיטות ההפרדה נבדקות תאי בעלי גרעין מדם טבורי בדרך כלל משמשות פתרון 10% הס או פתרון ג'לטין 3%. היעילות של משקעים של אריתרוציטים ובידוד של תאים גרעיניים בשני המקרים שווה בערך. עם זאת, במקרה של שימוש כמו ג'לטין סוכן לסדימנטציה אפשר לקבל מספר גדול במקצת של CFU-GM, מאשר כשמשתמשים הס. ההנחה היא כי ההבדל יעיל התאוששות CFU-GM מהירות שוויונית בשל בתצהיר של שברים בודדים או מולקולות הס יכולת תאי בעלי הגרעין נספגו על הקולטנים בתא שטח hematopoietic ובכך לחסום את הרגישות שלהם לגורמים מגרה מושבה, אשר משמשים כאשר culturing CFU-GM במבחנה. עם זאת, שני משקעים עשוי להיות מתאים לבודד תאים גרעיניים בעת יצירת בקנה מידה גדול טבורי דם טבורי הבנקים.

שיטות ההפרדה והקירור של דם טבורי באופן עקרוני אינן שונות מאלו המשמשות בעבודה עם תאי גזע המטופויטיים של דם פריפריאלי ומוח עצם של תורמים מבוגרים. אבל כאשר מכינים מספר גדול של דגימות טבורי דם טבורי עבור הבנקים שלה, שיטות ההפרדה חייב להיות, קודם כל, בעלות נמוכה. לכן, עכשיו, למרבה הצער, עבור הצרכים הקליניים כבר בשימוש בשיטות שגרתיות של בידוד cryopreservation של תאי דם טבורי משמשים, ושיטות יעילות יותר אבל יעיל כלכלית להישאר הרבה של הניסויים.

באופן כללי, הקריטריונים להערכת מספר תאים hematopoietic ואת הדרישות לחקר דגימות טבורי דם הוקמו על מנת לזהות סוכני זיהומיות. כדי להבטיח השתלת תאי דם הטבוריים hematopoietic, כל דגימות הדם יש לבחון בעיקר עבור זיהומים hematogenous ומחלות גנטיות. חלק מחברי להמליץ שיטות מיוחדות נוספות של לימוד דם טבורי לצורך אבחון מחלות גנטיות כגון אנמיה תלסמיה ו חרמשית, חסר deaminase אדנוזין, agammaglobulinemia ברוטון, מחלת Harlera ו מהמר.

על פי המלצות Ticheli L. Et al (1998), בכל דגימה של דם חבל הטבור הוא הכרחי כדי לקבוע את מספר התאים בעלי הגרעין, SB34-חיובי תאים CFU-GM, לשאת HLA-הקלדה כדי לקבוע את קבוצת דם ABO ו Rh חברותה. בנוסף, זריעה מתבצעת בקטריולוגית, בדיקות סרולוגיות ל- HIV זיהום CMV, HBsAg, הפטיטיס C, HTLY-I ו- HTLV-II (לוקמיה תאי T, אדם), עגבת, טוקסופלסמוזיס. תגובת שרשרת פולימראז ל cytomegalovirus וזיהום HIV הוא חובה.

עצם ההליך להשגת דם טבורי צריך להתבצע בהתאם קפדנית עם עקרונות הביו-אתיקה הרפואית. לפני תחילת איסוף הדם יש צורך לקבל את הסכמתה של האישה ההרה ליישום שלה. ראיון ראשוני עם אישה הרה לקבלת הסכמה מדעת לביצוע כל המניפולציות, החל מבדיקת דם ועד להשלמת התיעוד, מתבצע רק על ידי צוותים רפואיים. בכל מקרה לא קביל ביצוע כל התהליכים האלה על ידי אנשים עם ביולוגיים, כימי, תרופות וחינוך שאינו רפואי אחר, לנוכח הפרת הנורמות המקובלות לביואתיקה וזכויות אדם. עבור בדיקות חיוביות עבור הספק HBsAg, נוגדני הגורם הסיבתי של הפטיטיס C, HIV ועגבת דם טבורים לא נלקחו, וכן דגימות הדם שנאספו כבר נמחקו ונהרסו. יצוין כי המרכבה של זיהומים סמויים תינוקות נדירה בהרבה מאשר אצל מבוגרים, ולכן ההסתברות של העברה ופיתוח hematogenous של סיבוכים זיהומיות של חליטות hematopoietic של תאי דם טבורים היא נמוכה משמעותי מאשר במקרה של השתלת מח עצם מתורמים מבוגרים.

נקודה חשובה ביישום דם טבורי במרפאה היא הערכה של ההשתלה, אשר מבוססת על קביעת מספר תאי גזע hematopoietic בדגימת הדם הטבורי ואת מינון התא הנדרש להשתלה. סטנדרטים של המספר האופטימאלי של תאי דם טבורי הדרושים להשתלה עדיין לא פותחו. אין שום נקודת מבט מקובלת גם על פרמטרים שגרתיים כאלה כמו מספר תאים CD34 חיובי CFU-GM. מחברים אחדים העריכו את הפוטנציאל של תאים hematopoietic ידי ניתוח של תרבויות לטווח ארוך עם קביעת התוכן של יחידות המושבה להרכיב המשותף גרנולוציטים, אריתרוציטים, מונוציטים ו megakaryocytes - CFU-GEMM.

עם זאת, במסגרות קליניות, הערכה סטנדרטית של השתלות דם טבורי בדרך כלל כוללת רק את הקביעה של מספר של תאים גרעיניים או mononuclear.

אחסון תאי גזע המטופויטיים של דם טבורי

כמה בעיות קיימות בטכנולוגיה של אחסון תאי דם הטבורופטיים. כאשר להקפאה בתאי גזע hematopoietic על מנת להשיג מצב ההקפאה האופטימלי שלהם חייב למזער את כמות דם טבורים ותאי דם אדומים שהוסרו כדי למנוע המוליזה וסיכון התגובה אי התאמה של אנטיגנים כדורי (ABO, Rh). למטרות אלה, שיטות שונות לבודד תאים גרעיניים מתאימים. בתחילת שנות ה 90 של המאה הקודמת השיטה הנפוצה ביותר של הפרדת התאים בעלי הגרעין ב שיפוע צפיפות מבוסס על Ficoll עם צפיפות של 1.077 g / ml, או חלחול עם צפיפות 1.080 גרם / מ"ל. דם טבורי הפרדה על ידי שיפוע צפיפות מאפשר לבחור תאים חד גרעיניים בעיקר אך מוביל להפסדים ניכרים של ובתאים hematopoietic - עד 30-50%.

יעילות השיקוע של עמילן הידרוקסיתייל בתהליך של בידוד תאי דם טבורי של הטבור מוערכת בדרכים שונות. מחברים מסוימים מצביעים על איכות נמוכה של הפרדה בשיטה זו, בעוד חוקרים אחרים, להיפך, בין כל השיטות האפשריות מעדיפים להקצות דם טבורי HSC בדיוק באמצעות פתרון של 6% של עמילן הידרוקסיתיל. זה מדגיש את היעילות הגבוהה של שקיעה של תאים hemopoietic, אשר, על פי נתונים מסוימים, מגיע מ 84% ל 90%.

תומכי מבט אחר חושבים שכמעט כל תהליכי החלוקה לערב תאי yadrosoderzhashih הפסדים גדולים ומציעים לעשות הפרדה על ידי צנטריפוגה, הפרדת דם הטבורים לתוך 3 שברים: כדורי, לויקוציטים וטבעת פלזמה. על ידי בידוד התאים בדרך זו, המחברים מצאו כי התוכן של תאים mononuclear, תאים hematopoietic מוקדם תאים, ותאים עם CD + אימונופוטיפ + בסופו של דבר הסתכם 90, 88, ו 100% של הרמה המקורית, בהתאמה. ערכים דומים של צמיחת תאי דם טבורי מטוהרים על ידי שיטה זו התקבלו על ידי חוקרים אחרים: 92% של nucleated, 98% - mononuclear, 96% - CD34 חיובי תאים ו 106% של יחידות המושבה להרכיב היו מבודדים לאחר שקיעה.

בסוף 1990, ג 'לטין היה בשימוש נרחב כסוכן משקעים. מבחינה קלינית, באמצעות תאי גזע ג'לטין hematopoietic שבודד מדם חבל הטבור מאז 1994. כאשר באמצעות פתרון 3% של ג'לטין, היעילות של בידוד של תאים גרעיניים מגיע 88-94%. השימוש הנפוץ בג'לטין בהתפתחות של דם טבורי בנק אישר את יתרונותיו על פני אחרים משקעים סוכנים. ניתוח השוואתי של כל אחת מהשיטות הנ"ל הבידוד של התאים בעלי הגרעין במונחים של שימוש רציף שלהם בכל אחד דגימות דם טבורי הבדיקה הראתה כי תאים חד גרעיניים sedimenter-אאוט אופטימלית עם פנוטיפ CD34 + / CD45 +, כמו גם במספר CFU-GM ו CFU-GEMM הוא 3% תמיסת ג'לטין. זה הוכיח את עצמו באופן משמעותי פחות שיטות יעילות באמצעות שיפוע צפיפות Ficoll, והשימוש תאי מתיל ועמילן hydroxyethyl שבו אובדן תא hematopoietic הגיע 60%.

הרחבת נפח השתלת תאי גזע של דם טבורי קשורה לא רק עם התפתחות שיטות הייצור שלהם, אלא גם אחסון. ישנן בעיות רבות הקשורות ישירות הכנת דם טבורי לאחסון לטווח ארוך הבחירה של הטכנולוגיה cryopreservation אופטימלי עבור דגימות שלה. ביניהן נושאי ההתייעלות של ביצוע נהלי הפרדה, שימוש באמצעי התקשורת השונים, ושימוש בשיטות להכנת תאים מופשרים להשתלה. הובלה של דגימות הילידים של דם טבורי מתבצעת לעתים קרובות מתוך אזורים מרוחקים ממרכזי המטולוגיה. בהקשר זה, מתעוררת הבעיה של התקופות המותרות לאחסון דם טבורי מרגע קבלתו ועד תחילת שימור החלב, אשר יש חשיבות מיוחדת בהתפתחות של טבורי דם טבורי.

חקירת הפעילות התפקודית של תאי הדם הטבוריים hematopoietic לאחר אחסון ממושך (עד 12 שנים) בחנקן נוזלי אפשרה לנו לקבוע כי על 95% של תאים hematopoietic לא לאבד את היכולת השגשוג הגבוהה שלהם בתקופה זו. החוקרים מצאו כי אחסון דם טבורי בטמפרטורת החדר (22 מעלות צלזיוס) או 4 מעלות צלזיוס למשך 24 ו -48 שעות אינו מפחית באופן משמעותי את הכדאיות של תאים המטופויטיים, שהם 92 ו -88%. עם זאת, אם זמן האחסון הוארך לשלושה ימים, מספר התאים נוקליאבל קיימא בדם הטבורי מופחת באופן משמעותי. במקביל, במהלך מחקרים אחרים, נמצא כי כאשר מאוחסן 2-3 ימים בטמפרטורה של 22 או 4 ° C, הכדאיות של גרנולוציטים בוגרים, ולא תאים hemopoietic, משפיע בעיקר.

את הכדאיות של תאי גזע hematopoietic של דם טבורי יכול להיות מושפע לרעה על ידי רכיבי המערכת עבור אוסף שלה. ניתוח של השפעת תרופות נגד קרישת דם שונה, אשר מנגנון פעולה הוא בשל המחייב של יוני סידן (ACD, EDTA, XAPD-1) עבור ובתאים hematopoietic בתנאי אחסון דם טבורים של 24 עד 72 שעות מתגלה ההשפעה השלילית שלהם על יכולת הקיום של תאי בעלי גרעין. בהקשר זה, המחברים ממליצים על שימוש PBS (פתרון חיץ פוספט) עם התוספת של הפרין המקורי ללא חומר משמר בריכוז של 20 U / ml, אשר, לדעתם, מאפשר להגדיל את המשך למעלה דם טבורי unfractionated אחסון 72 שעות ושומרת את הפעילות התפקודית של יחידות מושבה להרכיב. עם זאת, במחקר של שימור CFU-GM ו CFU-G הראו כי זמן אחסון מדם טבורי לפני cryopreservation לא יעלה על תשע שעות. ברור, במקרה הזה צריך לפעול העיקרון שאם יש נתונים סותרים צריכים להשתמש חי אחסון דם טבורים מומלצי מינימום ולהתחיל תאים לתכנות הקפאה מבודדת מהר ככל האפשר.

כאשר הקפאת תאי גזע hematopoietic של דם טבורי דם, פתרון של 10% של DMSO משמש בדרך כלל כמו cryoprotectant. עם זאת, בנוסף אפקט cryoprotective לידי ביטוי, dimethylsulfoxide בריכוז זה יש אפקט ציטוטוקסי ישיר, אפילו תחת מצב של חשיפה מינימלית לתאי הדם להרכיב של דם טבורי דם. כדי להקטין את האפקט הציטוטוקסי של DMSO, טמפרטורת החשיפה אפס, עלייה במהירות של כל מניפולציות כביסה חוזרת ונשנית לאחר הפשרה של דגימות חבל הטבור מוחלים.

המכון להמטולוגיה ו טרנספוסיולוגיה של האקדמיה למדעי הרפואה של אוקראינה מפתחת כיוון מדעי מאז 1995, שמטרתה לחקור את הדם הטבורי כמקור חלופי לתאי גזע hemopoietic. בפרט, טכנולוגיות חדשות עבור cryopreservation בטמפרטורה נמוכה של תאים hemopoietic של דם טבורי מופרד ו מפוצל פותחו. כמו cryoprotectant, נמוך polyolineylpyrolidone משקל מולקולרי רפואי משמש. השיטה של cryopreservation של דם טבורי מופרך מבוסס על הטכנולוגיה המקורית של הכנה מראש של תאים להקפאה ואת הטכניקה של טיפול מיוחד ההשעיה התא מיד לפני ההשתלה.

אחד הגורמים החשובים ביותר המשפיעים על רמת הפעילות התפקודית של cryopreserved תאי גזע hemopoietic הוא קצב הקירור של ההשעיה התא, במיוחד במהלך שלב התגבשות. גישה תוכנה לפתרון הבעיה של מהירות וזמן של הקפאה מספק הזדמנויות גדולות ליצירת שיטות פשוטות ויעילות של cryopreservation, ללא שטיפת ההשעיה התא מ cryoprotectants לפני ההשתלה.

השלבים של הקפאה מיידית והפשרה הם מסוכנים ביותר עבור הכדאיות של תאים במהלך ההכנה שלהם. כאשר המקפיא של תאי hematopoietic מדי ממנו עלול לשבור בעת מעבר מהמדיום התאי של הנוזל לתוך השלב המוצק - התגבשות. כדי לצמצם את אחוז המוות התאי באמצעות cryoprotectants, מנגנוני פעולה ואפקטיבי של cryoprotectants אשר מתוארים באופן מלא בספרות המדעית.

טכניקות אופטימיזציה כיוון מבטיח של cryopreservation של מח עצם ותאי דם חבל טבור היא לשלב באותו פתרון לריכוזים נמוכים של cryoprotectants עם מספר מנגנוני פעולה שונים, למשל, פועלים על רמת תאיים של DMSO ו hydroxyethyl עמילן או אלבומין בעל השפעה תוחמת תאית.

עבור cryopreservation של תאי דם טבורי משמשים באופן מסורתי 20% פתרון DMSO אשר בחישה מכנית לצמיתות באמבט קרח, נמזג לאט לתוך ההשעיה תא להשיג שוויון (1: 1) יחס נפח תא ההשעיה ואת cryoprotectant. הריכוז הסופי של Sulphoxide dimethyl הוא 10%. השעית התא קוררה על תכנית בכל דקות HS מהירות krioustanovke / ל -40 ° C שלאחריו קצב הקירור הוגדל ל 10 ° C / min. לאחר שהגיע -100 ° C, מיכל עם ההשעיה התא ממוקם חנקן נוזלי (-196 ° C). בשיטה זו של cryopreservation, את הבטיחות של תאים פונקציונלי פעיל mononuclear לאחר הפשרה מגיע 85% של הרמה הראשונית.

שינויים בשיטות קריופרייבציה מכוונים להקטנת הריכוז של DMSO על ידי הוספת עמילן הידרוקסיתיל (הריכוז הסופי של דימתיל סולפוקסיד ועמילן הידרוקסיתי הוא 5% ו -6% בהתאמה). יעילות גבוהה של שילוב זה של cryoprotectants הוא ציין כאשר ההשעיה של תאים מיאלואידים הוא קפוא, עם cytoprotection לא פחות מאשר עם פתרון אחד של 10% של dimethylsulfoxide. מספר התאים הגרעיניים בת קיימא הגיע ל -96.7% מהרמה הבסיסית, והפעילות התפקודית שלהם, הנאמדת במספר CFU-GM, הייתה 81.8%.

בעת שימוש פתרון sulfoxide דימתיל בריכוזים הנעים בין 5 עד 10% בשילוב עם 4% hydroxyethyl עמילן (ריכוז סופי) מצא כי השימור תאי-חיובי CD34 בטווחים הללו dimethylsulfoxide כמעט ללא שינוי. במקביל בתנאים של צמצום הריכוזיות של DMSO מן 5 ל -2.5% שנצפה מוות המוני של תאי דם טבורי - מספר יחידות תא קיימא מצטמצם מ 85.4 -ל 12.2%. גם מחברים אחרים למסקנה שמדובר 5 ו 10% פתרון של sulfoxide דימתיל (ב התגלמות זכויות יוצרים - בשילוב עם סרום אוטולוגי) עם יעילות מקסימלית לספק cytoprotection במהלך cryopreservation של HSC דם טבורי. בנוסף, ברצף בטיחות גבוהה קפוא תא מופשר מסומן במקרה של שילוב של 5 או 10% פתרון DMSO 4% hydroxyethyl עמילן, במיוחד בקצב קירור מבוקר של TOS / min. במאמר אחר השתמש בפתרון cryoprotective מורכב משלושה מרכיבים כבר - DMSO, אלבומין אנושי מטוהר ובינוני RPMI ביחס של 1: 4: 5, אשר נוספה השעית התא עד ל יחסי נפח שווים (ריכוז DMSO הסופי היה 5%). לאחר הפשרה באמבט מים בטמפרטורה של 4 ° C, הבטיחות של CFU-GM חרג 94%.

מחברים אחדים ממליצים להשתמש בדם טבורי בלתי מופרז עבור קריאת דם, שכן כמויות משמעותיות של תאים hematopoietic הולכים לאיבוד במהלך הסרת תאי דם אדומים. ב התגלמות זו, פתרון של 10% של dimethylsulfoxide משמש כדי להגן על תאים mononuclear מן ההשפעות המזיקות של cryocrystallization. הקפאה מתבצעת בקצב קירור קבוע של HS / min ל -80 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן ההשעיה של תאי דם טבורי שקוע בחנקן נוזלי. בשיטה זו של הקפאה, תמוגה חלקית של אריתרוציטים מתרחש, ולכן דגימות דם אינם דורשים חלוקה. לאחר ההפשרה, ההשעיה התא נשטף מ hemoglobin חינם dimethylsulfoxide בפתרון של אלבומין אנושי או בסרום אוטולוגי של המטופל ומשמש להשתלה.

שימור ובתאים hematopoietic לאחר ההפשרה דם טבורי unfractionated הוא אכן גבוה מן מופרדים, אבל בקשר krioustoychivostyu של כדוריות דם אדומות יכול לגרום לבעיות חמורות כתוצאה עירוי שלאחר עירוי של תאי אדום ABO-בקנה. בנוסף, נפח הדם מופרד מאוחסן באופן משמעותי. מנקודת מבט קלינית, עדיין יותר רצוי להקפאה מבודדת בעבר מטוהרים מן השברים סלולריים אחרים של תאי hematopoietic דם טבורים.

בפרט, שיטה היא cryopreservation של תאי דם טבורי מופרדים המאפשר להסיר אריתרוציטים לקראת הקפאה, אשר משתמשת פתרון 6% עמילן hydroxyethyl בפתרון הרכב plazmozameshchath "Stabizol". לאחר ההפשרה, ההשעיה התא ובכך שהושג מוכן לשימוש קליני ללא מניפולציה נוספת.

לכן, כיום, ישנן דרכים רבות יעיל למדי של cryopreservation של דם טבורי דם. ההבדל העיקרי הוא כי דגימות דם הם קפואים מופרדים או כפופים ההפרדה לתוך שברים התא במהלך שלב ההכנה ותאים גרעיניים שנקטפו ללא תערובת של אריתרוציטים.

השתלת תאי גזע מדמוייטים של דם טבורי

בסוף שנות ה -80 - תחילת שנות ה -90 של המאה הקודמת נמצא כי הדם הטבורי המספק את העובר במהלך ההריון מאופיין בתכולה גבוהה של תאי גזע המטופויטים. הפשטות היחסית של קבלת תאי דם טבורי והיעדר בעיות אתיות ברורות קידמה את השימוש בתאי גזע של תאי דם טבורי ברפואה מעשית. ההשתלה המוצלחת הראשונה של דם טבורי לילד עם אנמיה פאנקוני שימשה כנקודת מוצא להרחבת נפח השתלות תאי גזע טבורי דם וליצירת מערכת למתן שירותי בנק. במערכת הגלובלית של בנק הדם הטבורי, הגדול ביותר הוא מרכז ניו יורק עבור דם שליה, אשר על מאזן של המכונים הלאומיים לבריאות. מספר הדגימות דם טבורי מאוחסן בבנק זה מתקרב 20 LLC. מספר הנמענים (בעיקר ילדים) גדל גם הוא, והשתלה מוצלחת בוצעה. על פי משרד הבריאות האמריקני, תקופת ההשתנות ללא חיים שלאחר השתלתם של מקבלי דם טבורי HSC כבר עלתה על 10 שנים.

הדבר אינו מפתיע, שכן מחקרים רבים של פוטנציאל hematopoietic של דם טבורים הראו כי הכמות והאיכות של תאי גזע המוקדמים לא רק אינה נחה אל מח עצם אנושי בוגר, אלא גם על ידי כמה צעדים יעלו אותו. פוטנציאל שגשוג גבוה של תאי גזע מדם טבורים שנגרם תכונות איתות תא התפתחותיים, הנוכחות של קולטניים על HSCs כדי גורמי גדילה ספציפיים, הקיבולת של תאי דם טבורים כדי autocrine ייצור של גורמי גדילה, גודל ואורך הטלומרים.

לפיכך, תכונות גנומיות ופנוטיפיות של תאי דם טבורי בדם טבורי קובעות מראש את ההשתלבות האיכותית של השתלה עם פוטנציאל גבוה לשחזור של תרומת hemopoiesis התורם באורגניזם הנמען.

היתרונות של תאי גזע hematopoietic של דם טבורי דם

בין היתרונות האמיתיים של שימוש בתאי גזע מדם hematopoietic טבורים להשתלה על מקורות אחרים של תאי hematopoietic יצוין כמעט אפס סיכון לבריאות של התורם (אם לא כאל שליה כאלה), תוך ביטול הצורך של הרדמה כללית. השימוש השתלת תאי גזע מדם טבורי מתרחב עקב בחלקו על ידי מערכת שתל HLA-תואם (תאימויות בין שנה לשלוש אנטיגנים). הטכניקה של אחסון לטווח הארוך של תאי דם טבורי hematopoietic במצב קפוא, אשר מגדילה את ההסתברות לקבל HLA-סוג נדיר ומפחיתה להשתלה אלוגנאית זמן חיפוש בהתאמה HLA. יחד עם זאת, הסיכון לפתח כמה זיהומים סמויים המועברים על ידי נתיב ההולכה מופחת באופן משמעותי. בנוסף, קיימת צורה זולה של ביטוח חיים ביולוגי בקשר עם האפשרות של שימוש בתאי דם טבורי להשתלה אוטולוגית.

עם זאת, בגלל כמויות קטנות של דם שניתן לגבות מן השליה (ממוצעת של לא יותר מ 100 מיליליטר) על פני השטח את הבעיה של קבלת הסכום המקסימאלי האפשרי של דם מהעורק חבל הטבור תוך הקפדה על תנאי מינימום הסיכון של זיהום חיידקים של דגימות נגזרות דם חבל טבור.

תאי hematopoietic פרימיטיביים מדם טבורי מזוהים בדרך כלל על ידי הנוכחות על CD34 glikofosfoproteina השטח שלהם, וגם על בסיס מאפייני הפעילות שלהן על ידי בחינת היווצרות assay או מושבת clonogenic במבחנה. ניתוח השוואתי הראה כי תוכן מרבי כבל מח עצם ודם של תאי mononuclear חיובי-CD34 בשבריר הם בהתאמה 1.6 ו 5.0%, לרמה מקסימלית של יחידות מושבה להרכיב בתוך תת-אוכלוסייה של תאים + CD34 - 80 ו 25%, יעילות שיבוט כוללות של CD34 + -cells - 88 ו 58%, תאי המושבה להרכיב מקסימלית עם פוטנציאל שגשוג גבוהה (HPP-CFC ב + CD34 -populyatsii) - 50 ו 6.5%. ראוי להוסיף כי יעילות שיבוט של CD34 + CD38-תאי ואת היכולת להגיב לגירויים ציטוקינים גם גבוה בתאי גזע hematopoietic של דם טבורי.

אנטיגנים שילוב פנוטיפי Thy-1, CD34 ו CD45RA מאשר את יכולת שגשוג גבוהה של תאים hematopoietic דם טבורי, וביטוי של שלושה אנטיגנים על פני השטח של תאי דם טבורי עולה כי הם שייכים לתא גזע. בנוסף, נקבע כי דם טבורי מכיל תאים עם פנוטיפ CD34 + כי אין סמנים הבחנה ליניארית. רמת הדם הטבורי של תת subpopulations עם הפרופיל פנוטיפי של CD34 + / לין הוא כ 1% מכלל המספר של תאים CD34 חיובי. ובתאים המטופואטיות להצמיח את הדם הטבורי כמו שורות תאים הלימפה, ומספר התמיינות תאים מיאלואידית ליניארי פלוריפוטנטיים, אשר גם מציין כי הם שייכים תאי גזע.

כאמור, ההבדלים המהותיים בין מוח העצם לדם הטבורי הם כמות התאים ההמטופויטים המשמשים להשתלה, המתקבלים בהליך אחד. כאשר פסד השתלת מח עצם של מסת תאים בתהליך ההפרדה, להקפאה, ההפשרה ובדיקה מותרים בטווח של 40-50%, תאי דם טבורי האובדן כזה הוא מאוד משמעותי, ממתי באמצעות המספר המספיק של השתלת HSC עלול להיות בלתי נסבל. לדברי ג Kogler ואח (1998), עבור השתלת תאי במשקל הגוף מקבל 10 קילו השתלת פוטנציאל (מספר כולל של דגימות דם טבורים שנאספו - 2098) עשוי להיות כל דגימות דם טבורים, משקל גוף 35 קילו - 67%, ורק 25% מהדגימות יוכלו לספק השתלה יעילה בחולים עם משקל גוף של 50-70 ק"ג. מצב קליני זה מצביע על הצורך לייעל ולשפר את האפקטיביות של שיטות קיימות של דגימה, שכפול ואחסון של תאי דם טבורי. לכן, את הסוגיות של סטנדרטיזציה של שיטות דיגום, בדיקה, הפרדת cryopreservation של דם טבורים עכשיו נדונו בהרחבה בספרות ליצירת בנק דם, השימוש בו במרפאת, כמו גם הקמת התנאים ותנאי האחסון של תאי גזע hematopoietic של דם טבורים.

[7], [8], [9],

שימוש בתאי גזע hematopoietic של דם טבורי ברפואה

בדרך כלל, עד 10 ⁶ תאי גזע hematopoietic יכול להיות מבודד דם טבורי , לעתים רחוקות יותר. בהקשר זה, עד היום, נשאלת השאלה של מספיקיות של כל כך הרבה תאי דם טבורי hematopoietic לשחזר את hematopoiesis של הנמען הבוגר. דעות בנושא זה חולקו. כמה חוקרים מאמינים כי כמות זו מספיקה לילדים השתלות, אבל קטן מדי כדי להשתיל אדם מבוגר, אשר הממשל הוא אופטימלי (7-10) × 10 ⁶ תאים חיובי CD34 לכל 1 ק"ג של משקל הגוף - ממוצע של 7 × 10 ⁸ להשתלה. מן החישובים האלה עולה כי מדגם חבל הטבור אחד מכיל 700 פעמים פחות תאי גזע hematopoietic מאשר נדרש להשתלה אחת לחולה מבוגר. עם זאת, כגון הערכה כמותית נעשית על ידי אנלוגיה עם מספר תאי מח עצם בעירוי וברמה מתעלמת לחלוטין מאפייני התפתחותיים של hematopoiesis.

בפרט, את העובדה של פוטנציאל שגשוג גבוה יותר של תאי גזע hematopoietic של דם חבל הטבור הוא התעלם בהשוואה תאים מבשר hemopoietic של מוח העצם. התוצאות של הפוטנציאל להרכיב המושבה במחקרים חוץ גופית מראים כי מנה בודדת של דם טבורי יכולה לספק שחזור של hematopoiesis של הנמען הבוגר. מצד שני, אל לנו לשכוח כי מספר HSCs יקטן אף בתהליך ההתפתחות העוברית: התוכן של תאים חיוביים-CD34 בדם חבל הטבור מצטמצם באופן ליניארי 5 פעמים בתקופה של 20 שבועות (דם עבור המועצות האזוריות הוא במקרה של סיום מוקדם של ההריון) כדי 40 שבועות של הריון (תקופת הלידות הפיזיולוגיות), המלווה בעלייה מקבילה וקבועה בביטוי של סמני ציטודיפיקציה ליניארית.

בשל היעדר גישה סטנדרטית כימות בדגימות דם טבורים של מחלוקת ובתאים על המינון האופטימלי של תאי גזע hematopoietic של דם טבורים ממשיך. כמה חוקרים מאמינים כי כבחירת הקריטריונים של דגימות דם טבורים עשויה לשמש את מספר תאי בעלי גרעין והתא mononuclear, לחשב מחדש על משקל הגוף של הנמען, כלומר, המינון שלהם. מחברים אחדים מאמינים כי סף כמותי מינימלי של תאים CD34 +, גם עבור ביצוע השתלה אוטולוגית של HSC, הוא 2 x 10 ⁶ / ק"ג. הגידול המינון של תאים hematopoietic כדי 5 × 10 ⁶ תאים / ק"ג (כולל של 2.5) כבר מספק יותר מתאים לתקופה שלאחר השתלת מוקדם, מפחית את שכיחות הסיבוכים זיהומיות ומקצר את תקופת טיפול אנטיביוטי מניעתי.

לדברי א דגליקמן ואח (1998) בהמטולוגיה להשתלה מוצלחת של תאי דם חבל הטבור הוא כניסתה של לפחות 3.7 × 10 ⁷ התאים בעלי הגרעין לכל משקל גוף 1 ק"ג של הנמען. עם ירידה במינון של תאי גזע hematopoietic עד 1 x 10 ⁷ ותאים פחות גרעיניים לכל 1 ק"ג של משקל הגוף, הסיכון של כישלון השתל וחזרה של סרטן הוא גדל בחדות. זה צריך להיות מוכר כי המספר המינימלי של תאים אב הדרושים להתאוששות מהירה של hemopoiesis לאחר GSG ALotransplantation עדיין לא ידוע. תיאורטית זה יכול להיות מושג באמצעות תא בודד, אבל בהשתלות מח עצם קליניות מובטח engraftment מהירה ויציב עירוי לפחות (1-3) × 10 ⁸ תאי בעלי גרעין לכל 1 קילו של משקל גוף מטופל.

מחקר מפורט לאחרונה כדי לקבוע את הכמות האופטימלית של HSC ב oncohematology כללה את התצפית של חולים של שלוש קבוצות מבודדים בהתאם לתוכן של תאים CD34 חיובי בחומר ההשתלה. חולים בקבוצה הראשונה קיבלו (3-5) x 10 ⁶ תאים / ק"ג. המינון של HSC בחולים בקבוצה השנייה היה (5-10) x 10 ⁶ תאים / ק"ג, והחולים בקבוצה השלישית קיבלו השתלה יותר מ 10 x 10 ⁶ CD34 + תאים / ק"ג. התוצאות הטובות ביותר נצפו בקבוצת מקבלי השתלה עם מספר תאים CD34 חיובי שווה ל (3-5) x 10 ⁶ / ק"ג. עם עלייה במינון של תאים המושתלים מעל 5 × 10 ⁶ / ק"ג, לא זוהו יתרונות משמעותיים מבחינה סטטיסטית. יחד עם זאת, תכולת HSC גדולה מאוד בהשתלה (10 x 10 ⁶ / kg) קשורה לעירוי חוזר של מספר משמעותי של תאים סרטניים שיוריים, מה שמוביל להיחלשות המחלה. לא היה קשר ישיר בין מספר תאים אלווגניים המושתלים לבין התפתחות התגובה "השתל לעומת המארח".

הניסיון המצטבר בעולם של השתלת דם טבורי HSC מאשר את פוטנציאל repopulation גבוהה שלהם. שיעור engraftment של השתלת דם טבורי בקורלציה עם מספר תאים גרעיניים הציג. התוצאות הטובות ביותר נצפות עם השתלת של 3 × 10 ⁷ / ק"ג, ואילו עבור מוח העצם מנה זו היא 2 × 10 ⁸ / ק"ג. על פי נתוני מרכזי התיאום, בסוף שנת 2000 בוצעו בעולם 1,200 השתלות של תאי דם טבורי, בעיקר מקרב תורמים (83%). כמובן, דם טבורי צריך להיחשב כחלופה מוח העצם להשתלה לחולים עם hemoblastosis.

עם זאת, מקור קורדובה טבע בילוד של רקמות hematopoietic עידוד בשל נוכחותם של תכונות תפקודיות משל GCW. עם זאת, רק ניסיון קליני עשוי לתת תשובה לשאלה, האם די דגימת דם חבל טבור כינון מחדש hematopoietic בוגרת של הנמען עם aplasia של hematopoiesis. השתלה של תאי דם טבורי משמש לטיפול במחלות רבות של גידול והטבע הלא-גידול: לוקמיה התסמונת המיאלודיספלסטית, לימפומה שאינה הודג'קין, ו נוירובלסטומה, אנמיה אפלסטית, אנמיה Fanconi מולד יהלום שחור אוהד, מחסור של הידבקות לויקוציטים, תסמונת Barr, גונתר המחלה Harlera תסמונת, תלסמיה .

תשומת לב קרובה ומחקרים נפרדים ראויים להיבטים החיסוניים של השתלת תאי דם בדם הטבורי. ממחקר עולה כי במקרה של השתלת תאי גזע מדם טבורי מתורמים עם תוצאות השתלת HLA בהתאמה שלמות הם די השביע רצון, כי, על פי המחברים, מה שמעיד על דם טבורי immunoreactivity נמוך יותר מח עצם.

מחקר מפורט של הרכב הסלולר של דם טבורי הראו תכונות של שניהם ספקטרום פנוטיפי של תאים מפעיל של מערכת החיסון ופעילות פונקציונלי שלהם, המאפשר לשקול דם טבורי כמקור HSCs עם סיכון נמוך יחסית של התגובה "שתל מול המארחת". תכונות נוספות בגרות פונקציונליות כבל עם מערכת חיסון תקין בתאי דם יצוינו חוסר איזון של ייצור ציטוקינים וירידה ברגישות לציטוקינים תקנה חדשה של התגובה החיסונית. הנובעים כתוצאה של עיכוב של פעילות של לימפוציטים ציטוטוקסיים נחשב גורם תורם להיווצרות של סובלנות אימונולוגיים לרקמות hematopoietic המושתלים. באוכלוסיה של לימפוציטים בדם טבורי, לעומת מח עצם ודם היקפי מתורמים מבוגרים, הנשלט תאים פעילים, בשלה ותאי מדכא. זה מצביע על ירידה בזמינות של תאי דם טבורי לימפוציטים לתגובה החיסונית. התכונה החשובה של אוכלוסיית המונוציטים של תאי דם טבורי היא התכולה הנמוכה של תפקוד אנטיגן-תפקודי שלם ופעיל.

מצד אחד, במידה נמוכה של בגרות של תאי מפעיל של מערכת החיסון בקריאות דם טבורי מרחיב השימוש בו במרפאת, שכן תכונות אלה מאפשרות הקטנת עוצמת סכסוך חיסון בין תאי תורם למקבל. אבל, מצד השני, אנחנו יודעים על קיומו של קשר בין מידת תגובה "מחלת השתל נגד מאכסן" ותוצאת antitumor השתלה, כלומר, ההשפעה של ההתפתחות "שתל נגד לוקמיה". בהקשר זה, נערך מחקר של cytotoxicity antitumoral של תאי דם טבורי. תוצאות המחקר מראים כי, למרות התגובה באמת נחלשה החיסונית של תאי דם טבורים לגירוי אנטיגני, מופעלים מלכתחילה הם תאי ההרג הטבעיים והתאים killeropodobnymi כי מעורבים באופן פעיל את מנגנוני יישום הרעיל לתאים אנטי סרטני. יתר על כן, בתת אוכלוסיות הלימפוציטים בדם טבורים נמצאו עם פנוטיפ CD16 + CD56 + ו- CD16 "TCRa / p +. ההנחה היא כי תאים אלה בצורה מופעלת ליישם תגובה" שתל נגד לוקמיה".

במכון האונקולוגי, האקדמיה למדעים רפואי של אוקראינה תאים hematopoietic cryopreserved מדם טבורי ניתנו לחולים בסרטן עם hypoplasia מתמשך של hematopoiesis עקב כימותרפיה והקרנות. בחולים אלה, השתלה של תאי גזע hematopoietic של דם טבורים משוחזר ביעילות דיכוי דם, כפי שמעידה עלייה מתמשכת של אלמנטים בוגרים נוצרו בדם ההיקפי, כמו גם עליית אינדיקטורים המאפיינת את המדינה חסינה הסלולר הלחות. יציבות של אפקט repopulation לאחר השתלת תאי דם בדם יוצרים דם טבורי מאפשר המשך קרינה וכימותרפיה בלי להפריע את מהלך הטיפול. ישנן עדויות של חולי סרטן דם טבורי תאי גזע של שתל יעיל: הסיכון השנתי של הישנויות גידול בשימוש שלהם היה 25% לעומת 40% בחולים עם גן מח עצם אלוגנאית מושתלים.

מנגנון הפעולה של תאי גזע מדם טבורי cryopreserved צריך להיחשב התוצאה של גירוי לחות של מקבלי hematopoiesis שנגרמו היכולת הייחודית של תאים בילוד כדי autocrine ייצור של גורמי גדילת hematopoietic, כמו גם תוצאה של engraftment הזמני של תאי תורם (כאישור - עלייה משמעותית את התוכן של נמען המוגלובין היקפי דם העוברי 7-15 יום לאחר העירוי בהשוואה לנתוני הבסיס). היעדרות מקבלי תגובות דם טבורים שלאחר עירוי - תוצאה של הסובלנות שלה היחסית של תאי מערכת חיסון, כמו גם את קריטריון ביטחון התועלת של חומר ביולוגי cryopreserved.

ובתאים התאים T לימפוציטים רוצח דם טבורים מסוגל הפעלה תחת השפעת גירוי ציטוקינים אקסוגניים המשמש לפתח חדשות לשעבר vivo ו שיטות vivo של גרימת תאי הלימפה ציטוטוקסיות אנטי סרטניים עבור חיסוני השתלה שלאחר מכן. בנוסף, "חוסר בגרות" של הגנום של תאי מערכת החיסון בדם הטבור מאפשר שימוש בהן לצורך שיפור פעילות אנטי-סרטנית ידי הדמיה מולקולרית.

כיום, דם טבורי נמצא יישום רחב בעיקר המטולוגיה ילדים. אצל ילדים עם אלוגרפט לוקמיה חריפה של תאי גזע hematopoietic של דם טבורי לעומת allografts מח עצם, מפחיתה באופן משמעותי את השכיחות של תגובת "שתל מול המארחת". עם זאת, יש תקופה ארוכה יותר של neutropenia ו thrombocytopenia, ולמרבה הצער, רמה גבוהה יותר של 100 יום שלאחר השתלות שלאחר המוות. תקופה ארוכה יותר של התאוששות גרנולוציטים וטסיות הדם ההיקפיים יכולה להיות בגלל בידול מספיק של תת-אוכלוסיות בודדות של תאים חיוביים CD34 של דם חבל טבור, כפי שמעידה הרמה הנמוכה של קליטת rhodamine רדיואקטיבי והביטוי נמוך של אנטיגנים CD38 על פני השטח שלהם.

במקביל, ההשתלה של תאי גזע hematopoietic של דם טבורים של חולים מבוגרים, בצעו בשל חוסר שניהם תורמים מח עצם קשור תואם, כמו גם הזדמנויות לגייס אוטולוגי HSC הראתה הישרדות ישנה ללא שנתי גבוהה בחולים מתחת לגיל 30 שנים (73%) . טווח גילי נמען רחב (18-46 שנים) ירד ההישרדות ל 53%.

ניתוח כמותי של תאים עם דם מח וחוט עצם פנוטיפ CD34 + הראה גבוה (3.5 פעמים) תוכנם של מח העצם, אלא דם טבורים הראה דומיננטיות משמעותיות של תאים עם פרופיל פנוטיפי של CD34 + HLA-DR .Izvestno, סמני chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR להתרבות יותר פעיל מאשר תאים עם immunophenotype CD34 + HLA-DR +, כמו במחקרים ניסיוניים של צמיחה של תרבות ארוכת טווח של תאים hematopoietic במבחנה. אבות תא פרימיטיביים עם פנוטיפ CD34 + CD38 כלולים דם טבורים ומח עצם, אך תאי דם חבל טבור עם הסמן להגדיר יש CD34 + CD38 פעילות clonogenic גבוהה יותר מאשר תאי hematopoietic של אותו הפנוטיפ, מבודדים ממח עצם התורם מבוגר. בנוסף, תאי דם חבל הטבור עם immunophenotype CD34 + CD38 יתרבו בתגובה לגירוי עם ציטוקינים (IL-3, IL-6, G-CSF) ולהעתיק 7 פעמים יותר מושבות של תרבויות לטווח ארוך יותר מאשר תאי מח העצם.

הבנקים של תאי גזע טבורי דם

להתפתחות תקינה של השדה החדש של רפואה מעשית - השתלת תאי גזע מדם טבורים, כמו גם לבצע השתלות של תאי גזע במח עצם hematopoietic, אתה חייב להיות בעל רשת ענפה של בנקי דם, אשר הוקמו כבר בארה"ב ובאירופה. רשתות בתוך המדינה של דם טבורי הבנקים מאוחדים על ידי איגוד הבנקים Netcord. ההיתכנות של הקמת עמותה בינלאומית של בנק דם טבורים נקבעת על ידי העובדה כי על מנת לבצע השתלות שאינן קשורות צריכות מספר גדול של דגימות דם חבל טבור המוקלד, המאפשרים לבחור את תורם HLA-זהה. רק הקמת מערכת של בנקים עם אחסון של דגימות דם מסוגים שונים HLA בהם באמת יכול לפתור את הבעיה של מציאת התורם הנדרש. ארגון של מערכת כזו של בנקים טבורי דורש התפתחות ראשונית של נורמות אתיות ומשפטיות, אשר נדון כרגע ברמה הבינלאומית.

כדי ליצור דם טבורי בנקים באוקראינה, יש צורך לעבד מספר הוראות ומסמכים.

ראשית, מדובר בשאלות של סטנדרטיזציה של שיטות הדגימה, פיצול והקפאת דם טבורי. יש צורך להסדיר את הכללים עבור דם טבורי הדגימה בבתי חולים ליולדות בהתאם לדרישות של אתיקה רפואית, כדי לקבוע את כמות מינימלית של דם טבורי המבטיח השתלה מוצלחת. זה צריך להיות לעומת וסטנדרטיזציה של קריטריונים שונים של הערכת האיכות ומספר ובתאים hematopoietic כמו גם שיטות HLA-הקלדה ושיטות אבחון של מחלות גנטיות ומחלות זיהומיות שיכולות להיות מועבר על ידי עירוי של תאי גזע מדם טבורי להגדיר קריטריונים לבחירה הכללית תורמים בריאים. ראוי גם לדון בהקמת מתקני אחסון נפרדים עבור תאים בסרום, דנ"א שמקורם בדם טבורי.

זה בהחלט הכרחי כדי לארגן רשת מחשבים של נתונים על הדם הטבורי ליישום הקשר עם רושמים של תורמים מוח עצם. כדי לפתח עוד השתלת תאים, יש לפתח פרוטוקולים מיוחדים להשוואה בין תוצאות הדם הטבורי לבין השתלת מח עצם מקרובי HLA זהים ותורמים שאינם קשורים. בהתמודדות עם בעיות אתיות ומשפטיות של השימוש הקליני של תאי דם טבורי יכול לעזור לתקנן תיעוד, לרבות הסכמה מדעת של ההורים, כמו גם הודעה על אמא או קרובי משפחה של הילד מזוהה על ידי גנטי ו / או מחלות זיהומיות.

התנאי הקובע לפיתוח השתלת תאי באוקראינה יהיה האימוץ של התכנית הלאומית לתרומת תאי גזע לבין ההתפתחות של שיתוף פעולה בינלאומי עם מדינות אחרות באמצעות האגודה העולמית של מח עצם מתורם (WMDA), תכנית מח עצם מתורם הלאומי בארה"ב (NMDP) ורושמת אחרת.

בהכללה עדיין היסטוריה קצרה של השתלת תאי גזע hematopoietic של דם חבל הטבור, נציין כי ההנחה הראשונה של אפשרות היישום הקליני של דם חבל הטבור, שנעשו בתחילת שנות ה -70, אושרו ב 80 שנים את התוצאות של מחקרים ניסויים בבעלי חיים, ובשנת 1988 בשנה כבר ביצעו את ההשתלה הראשונה בעולם של תאים hematopoietic של דם טבורי אנושי הטבור, ולאחר מכן החלו לפתח רשת גלובלית של בנקי דם טבורי. אחרי 10 שנים, מספר החולים עם תאי hematopoietic מושתלים, קרוב דם חבל טבור אל 800. ביניהם היה חולים עם מחלות גידול שונות (לוקמיה, לימפומה, גידולים מוצקים) ו-גידול הלא (כשל חיסוני מולד, אנמיה, מחלות הקשורות בהפרעות מטבוליות) בטבע.

בדם טבורי, התוכן של אבות תאים מוקדמים ומחויבים גבוה יותר מאשר בדם ההיקפי של מבוגר. על ידי מספר יחידות גרנולוציטים-מקרופאג ויוצרים הפוטנציאל השגשוג שלהם, דם טבורי באופן משמעותי עולה על הדם ההיקפי של מבוגרים גם לאחר כניסתה של גורמי גדילה. בתרביות תאים ארוכות טווח במבחנה, הייתה פעילות רבה יותר של תאי דם טבורי ותאי מוח עצם. הרגעים הקריטיים השתלת תאי גזע מדם טבורי הם המספר הפוטנציאלי hematopoietic ואת התאים בעלי הגרעין, בנוכחות זיהום ציטומגלווירוס, התורם HLA-תואם והנמען, משקל הגוף וגיל המטופל.

עם זאת, השתלת תאי גזע של דם טבורי צריכה להיחשב כחלופה להשתלת מח עצם כדי לטפל במחלות דם חמורות, במיוחד אצל ילדים. בעיות קליניות של השתלת תאי גזע מדם טבורים נפתרו בהדרגה - יש כבר די טכניקות דגימה יעילות, הפרדה להקפאת תאי דם טבורים, ספקו את התנאים להיווצרות בנקי דם טבורים, שיטות הבדיקה משתפרות תאי בעלי גרעין. אופטימלי להפרדה עם רכש בקנה מידה גדול של תאי גזע hematopoietic של דם טבורי דם בעת יצירת בנקים צריך להיחשב פתרון ג'לטין 3% ו 6% פתרון של עמילן הידרוקסיתיל.

Perehrestenko פ ואח '(2001) מציין בצדק כי השתלת תאי גזע מדם טבורים צריכה לקחת את מקומה הראוי האמצעים הטיפוליים המורכבים כדי להתגבר על הדיכאון של hematopoiesis של מקורות שונים, כמו דם טבורי GSK נבדל מספר יתרונות משמעותיים, ביניהם חשוב היא הקלות היחסית של קציר, אין סיכון לתורם, הזיהום נמוך של תאים בילוד עם וירוסים ועלות נמוכה יחסית של ההשתלה. חלקם מציעים החוקרים כי השתלת תאי גזע מדם טבורי בתדירות נמוכה יותר מאשר תאי מח העצם מלווה בסיבוכים הקשורים התגובה של "שתל מול המארחת", אשר נובעת, לדעתם, ביטוי חלש של תאי דם טבורי של אנטיגנים HLA-DR ו שלהם חוסר בגרות. עם זאת, האוכלוסייה העיקרית של תאי בעלי גרעין של דם טבורים הם לימפוציטים (תאים-חיובי SDZ), שתוך הוא כ 50%, המהווה 20% פחות מאשר הדם ההיקפי של מבוגר, אך ההבדלים פנוטיפי של תת-אוכלוסיות של תאי T מ אלה המקורות הם חסרי משמעות.

בין הגורמים המשפיעים ישירות על ההישרדות של השתלת תאי גזע של דם טבורים, נציין לגיל המטופלים (את התוצאות הטובות ביותר נראות מקבלים עד גיל 5 שנים), האבחון המוקדם של המחלה ואת סוג של לוקמיה (יעילות גבוהה משמעותית לוקמיה החריפה). חשיבות רבה הם מינון של תאי גזע טבורי טבורי דם, כמו גם תאימות HLA שלהם עם הנמען. אין זה ניתוח תאונה של היעילות הקלינית של GSK השתלת דם טבורי אונקולוגיה המטולוגיה מראה את התוצאות הטובות ביותר של טיפול באמצעות השתלות נלוות: הישרדות לשנה ללא מחלה במקרה הזה מגיעה 63%, ואילו ההשתלה הקשורה - רק 29%.

לפיכך, נוכחות של מספר רב של תאי גזע מדם טבורי ותאי גזע hematopoietic בילוד יכולת גבוהה repopulyatsionnaya להפוך אותם מתאים להשתלה אלוגנאית בחולים עם ממאירויות המטולוגיות. עם זאת, יש לציין כי שחזור של hematopoiesis לאחר השתלה של תאי גזע hematopoietic של דם טבורי "נמתח בזמן": תוכן שחזור ב נויטרופילים בדם ההיקפי מתרחשת בדרך כלל לקראת סוף השבוע ה -6, ו תופעה תרומבוציטופניה להיעלם, בדרך כלל לאחר 6 חודשים. בנוסף, התאים בשלה יוצרי דם דם חבל הטבור אינה שוללת הסכסוך אימונולוגיים: כמובן חמור של "שתל מול המארחת" התגובה אקוטיים וכרוניים ציין בהתאמה ב 23 ו 25% ממקבלי. הישנות של לוקמיה חריפה עד סוף השנה הראשונה לאחר השתלת תאי דם טבורי של הטבור נרשמות ב -26% מהמקרים.

[10], [11]