ניתוח של פולימורפיזם אורך מגבלה הגבלה

השימוש הרחב באנדוקלזות מגבילות שונות לניתוח הדנ"א הכרומוזומאלי חשף שונות עצומה בגנום האנושי. אפילו שינויים קטנים באזורי הקידוד והרגולציה של גנים מבניים יכולים להוביל לסיום הסינתזה של חלבון מסוים או לאובדן תפקודו בגוף האדם, אשר משפיע בדרך כלל על הפנוטיפ של המטופל. עם זאת, כ 90% של הגנום האנושי מורכב רצפים שאינם קידוד כי הם משתנים יותר מכילים הרבה מה שנקרא מוטציות ניטרליות, או פולימורפיזם, ואין להם ביטוי פנוטיפי. אתרים פולימורפיים כאלה (לוקוסים) משמשים לאבחון מחלות תורשתיות כסמנים גנטיים. לוקוסים פולימורפיים נמצאים בכל הכרומוזומים ומקושרים לאזור מסוים של הגן. לאחר קביעת לוקליזציה של locus פולימורפית, ניתן לקבוע עם איזה גנום מוטציה קשורה שגרמה המחלה אצל המטופל.

כדי לבודד אזורים פולימורפיים של דנ"א, אנזימים חיידקיים משמשים - אנזימים הגבלה, אשר המוצר מהם אתרי הגבלה. מוטציות ספונטניות המתרחשות באתרים פולימורפיים הופכות אותן עמידים או לחילופין רגישות לפעולה של אנזים הגבלה מסוים.

שינויי מוטציה באתרי הגבלה ניתן לאתר על ידי שינוי אורך של שברי DNA מוגבל, על ידי הפרדת אותם באמצעות אלקטרופורזה והכלאה הבאים עם בדיקות DNA ספציפיים. בהיעדר הגבלה באתר פולימורפי, יתגלה שבר גדול אחד על האלקטרופורם, ואם קיים, יהיה חלק קטן יותר. נוכחות או היעדר של אתר הגבלה באותו לוקוסים זהה של כרומוזומים הומולוגיים מאפשר לתווית אמין הגן המוטנטי והנורמלי לעקוב אחר השידור שלה לצאצאים. כך, במחקר של DNA של חולים, בשני כרומוזומים אשר אתר הגבלה נמצא באזור פולימורפי, שברי קצר של DNA ייחשף על electrophoregram. בחולים הומוזיגוטים למוטציה שמשנה אתר הגבלה פולימורפי, יתגלו שברי אורכים גדולים יותר, ובקטעים הטרוזיגיים יאותרו קטעים קצרים וארוכים.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]