וירוס הפטיטיס A

נגיף הפטיטיס A הוא מחלה מדבקת אנושית המאופיינת על ידי פגיעה בכבד השכיחה מתבטא שיכרון קליני צהבת. הפטיטיס וירוס זוהה בשנת 1973 על ידי ס פיינסטון (ואחרים) באמצעות השיטה של מיקרוסקופ אלקטרונים החיסונית על ידי הדבקת קופים - שימפנזים ו marmosets. המהות של השיטה של מיקרוסקופית אלקטרונים החיסונית היא כי נוגדנים ספציפיים (בסרום של הבראה) מתווספים לסרטן של הצואה של החולה עם הפטיטיס A ואת המשקע נתון למיקרוסקופ אלקטרונים. בשל אינטראקציה של וירוסים עם נוגדנים ספציפיים, הם עוברים צבירה ספציפית. במקרה זה, הם יותר קל לזהות, ו צבירה תחת השפעת נוגדנים מאשרת את הספציפיות של הפתוגן. גילויו של ס 'פיינסטון אושר בניסויים על מתנדבים.

הפטיטיס וירוס יש צורה כדורית, קוטר של virion הוא 27 ננומטר. הגנום מיוצג על ידי רנ"א חיובי יחיד עם מסה של 2.6 MD. Supercapsid נעדר. סוג הסימטריה הוא מעוקב - icosahedron. לקפסיד יש 32 קפסומרים, הוא נוצר על ידי ארבעה פוליפפטידים (VP1-VP4). על ידי המאפיינים שלו, וירוס הפטיטיס A שייך הסוג Heparnovirus, משפחת Picornaviridae. מבחינה אנטיגנית, וירוס הפטיטיס A (וירוס הפטיטיס A) הוא הומוגני. HAV מכפיל היטב בגוף של שימפנזים, בבונים, hamadryls וקופי הימורים (marmosets). במשך זמן רב, הנגיף לא היה מסוגל לטפח. רק בשנות השמונים. אפשר היה להשיג תרבויות תאים שבהן הוא מתפשט. בתחילה השתמשתי למטרות אלה, הונצח תא הכליה עוברי קו מקוק רזוס (תרבות FRhK-4), ועכשיו - מושתלת שורת תאי כליות של קופים ירוקים (תרבות 4647).

על פי ההמלצות של מומחים של ארגון הבריאות העולמי, המינוח הבא של סמנים של וירוס הפטיטיס A אומץ: הפטיטיס וירוס נוגדנים נגיף הפטיטיס A: אנטי NAV IgM ו אנטי NAV IgG.

HAV הוא חלקיקים קטנים עם קוטר של 27-30 ננומטר, לאחר סימטריה icosahedral ובעל הומוגניות. על דפוס עקיפה האלקטרון המתקבל על ידי השיטה של צבירה החיסונית, חלקיקים צפופים אלקטרונים עם קפסומרים מסודרים באופן סימטרי ממוקם באופן מזויף. עם ניגוד שלילי, הן חלקיקים מלאים וריקים מזוהים ההכנות. Nucleocapsid NAV, בניגוד לזה של שפעת, אין בליטות משטח וקרומים. חשוב גם כי HAV virion אין מבנה בצורת לב.

על פי מאפיינים פיזיים וכימיים של הפטיטיס וירוס קשורה למשפחת Picornaviridae, הסוג enterovirus עם מספר אטומי 72. עם זאת, טקסונומיה זו היה חריג מדי, שמצאו אפשר להשאיר את "צהבת וירוס" הטרמינולוגיה.

כמו כל וירוסים של Picornaviridae המשפחה, וירוס הפטיטיס A מכיל חומצה ribonucleic. כמה מעבדות הראו את האפשרות של שיבוט הגנום של וירוס הפטיטיס A, אשר פותח את האפשרות של קבלת ההכנות חיסון.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14]

ההתנגדות של וירוס הפטיטיס A

הנגיף עמיד יחסית לטמפרטורה גבוהה, חומצות, ממיסים שמנים (אין שומנים), חיטוי, הוא סובל טמפרטורה נמוכה גם. כל זה תורם לשימור לטווח ארוך בסביבה החיצונית. בטמפרטורת החדר, הוא שורד במשך כמה שבועות, על 60 מעלות צלזיוס מאבד חלקית infectivity לאחר 4-12 שעות, לחלוטין - לאחר כמה דקות ב 85 ° C. עמיד מאוד לכלור, בשל אשר הוא מסוגל לחדור לתוך מי ברז דרך המחסומים של צמחים לטיפול במים.

לסיכום כל הנתונים, אנו יכולים לאפיין את וירוס הפטיטיס A כדלקמן:

• האדון הטבעי הוא האדם;
• חיות ניסיוניות - מרמוזט, שימפנזה;
• מקור זיהום - צואה;
• מחלה - מגיפה אנדמית;
• נתיב ההולכה הוא בעל פה;
• תקופת הדגירה - 14-40 יום;
• המעבר הפטיטיס כרונית - לא ציין.

המאפיינים החיסוניים של NAV הם כדלקמן:

• אבטי טיפוס - Ms-l, CR-326, GVG. כולם דומים או זהים מבחינה אימונולוגית;
• נוגדנים - IgM ו- IgG, מיוצרים בתגובה להכנסת חלבונים מבניים של הנגיף ומגינים;
• אני פעולה trophic של האדם y-globulin בסרום - מגן או מחליש את המחלה במצב של הממשל לפני ההדבקה או במהלך תקופת הדגירה.

מאפיינים פיסיקליים-כימיים של NAU הם כדלקמן:

• מורפולוגיה היא חלקיק כדורית לא פגז עם סימטריה מעוקבת, הקפסיד מורכב מ 32 קפסומרים;
• הקוטר הוא 27-30 ננומטר;
• הצפיפות ב- CsCl (g / cm3) היא 1.38-1.46 (חלקיקים פתוחים), 1.33-1.34 (virion בוגרת), 1.29-1.31 (virions בוגרת, חלקיקים ריקים);
• מקדם השיקוע הוא 156-160 virions בוגרת;
• חומצה גרעין - חד גדילי, RNA ליניארי;
• משקל מולקולרי יחסי - 2,25 106-2,8 106KD;
• מספר נוקליאוטידים הוא 6,500-8,100.

היציבות של NAV בהשפעות פיסיקוכימיות היא כדלקמן:

• כלורופורם, אתר - יציב;
• כלור, 0.5-1.5 מ"ג / ליטר, 5 ° C, 15 דקות - אי-פעילות חלקית;
• כלוראמין, 1 גרם / l, 20 ° C, 15 דקות - השבתה מלאה;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 שעות - אי-פעילות מלאה, 1: 350, 20 ° C, 60 דקות - אי-פעילות חלקית.

טמפרטורה:

• 20-70 ° C - יציב;
• 56 ° C, 30 דקות - זה יציב;
• 60 ° C, 12 שעות - השבתה חלקית;
• 85 ° C, 1 דקות - אי-פעילות מלאה;
• מעוקר, 120 ° C. 20 דקות - אי-הפעלה מלאה;
• חום יבש, 180 ° C, 1h - הפעלה מלאה;
• UV, 1.1 וואט, 1 דקות - השבתה מלאה.

הנתונים המוצגים מראים כי התכונות הפיסיקוכימיות של נגיף הפטיטיס A הן הקרובות ביותר לאנטרובירוסים. כמו enteroviruses אחרים, HAV עמיד בפני פתרונות חיטוי רבים, פעיל לחלוטין במשך כמה דקות ב 85 ° C ו autoclaved.

זה הוכיח כי הפטיטיס וירוס יכול להתרבות בתרבויות בשכבה עיקריות ומתמשכות של שורות תאים אנושיות, ואת הקוף. במיוחד רבייה פעילה של הפטיטיס וירוס בתרבויות במבחנה הוא ציין בעת השימוש כמו חומר המוצא תמציות קופים חולים כבד. עם זאת, יש לציין כי כל הניסויים פי רפרודוקציה של הפטיטיס וירוס ב במבחנת תרבויות לציון תקופת דגירה ארוכה קטעים ראשוניים (-10 עד 4 שבועות), ובהמשך הצטברות של עליות חומר גנטיות נגיפיות, אך בערכים המוחלטים הם מאוד קטין מוליד חוקרים רבים מדבר על שכפול שלם של הפטיטיס וירוס בתרביות רקמה.

לסיכום נתוני הספרות על הרבייה של וירוס הפטיטיס A מתרבויות שאינן שורש, ניתן לומר כי עובדה של ניסיון ממושך של HAV במבחנה אינה מוטלת בספק. התנאים האופטימליים לרמה גבוהה יציבה של שכפול ויראלי לא זוהו סוף סוף, וזה מגביל את המחקר של תכונות ביולוגיות שלה, ייצור של מקור של ריאגנטים לייצור אבחון ועיצוב של חיסונים.

עם זאת, ניתן למצוא בספרות גם שיקולים אופטימיים יותר לגבי בעיה זו. הפתרון של כל הנושאים הקשורים לטיפוח וירוס הפטיטיס A הוא עניין לעתיד הקרוב. כאשר לומדים את התנאים האופטימליים HAV התפשטות בקופי רזוס כליות עובריות בתרבית תאי חשף שני שלבים: בשלב ייצור וירוס מדבק (עד 6-8 ימים במעבר 5) ואת השלב של הצטברות האינטנסיבית של אנטיגן ויראלי. הוא הראה גם כי הצטברות המשמעותית ביותר של אנטיגן ויראלי מתרחשת בתנאים של מה שנקרא גידול רולר (סיבוב בקבוקים). בדרך זו פותחות אפשרויות רבות להשגת אנטיגן תרבותי בכמויות גדולות, וכתוצאה מכך יופיע חומר המוצא להכנת מערכות אבחון וייצור של תכשירי חיסון.

אפידמיולוגיה של הפטיטיס A

הפטיטיס וירוס יש פתוגניות גבוהה עבור בני אדם. על פי המסקנה של WHO (1987), עבור תחילת המחלה, זה מספיק כדי להדביק רק virion אחד. עם זאת, המינון המדבק המעשי הוא כנראה הרבה יותר גבוה. מקור ההדבקה הוא רק אדם נגוע. הנגיף הוא שוחרר בכמויות גדולות עם צואה 12-14 ימים לפני הופעת צהבת ובתוך 3 שבועות. תקופה איסטרית. הבדלים משמעותיים בבידוד של הפתוגן בחולים עם צורות icteric, צהבת ואסימפטומטית של הפטיטיס A לא זוהו. שיטת ההדבקה היא צואה-בעל פה, בעיקר מימית, וגם על ידי נתיבי בית ואוכל. שיטת ההדבקה היא צואה-בעל פה, בעיקר מימית, וגם על ידי נתיבי בית ואוכל. המסלול העיקרי (העיקרי) של העברת הנגיף הוא מים. זה גם אפשרי זיהום מוטס. הרגישות של האוכלוסייה היא אוניברסלית. לרוב ילדים מתחת לגיל 14 חולים. המחלה יש עונת הסתיו החורף מובהק.

[15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]

סימפטומים של הפטיטיס A

תקופת הדגירה נעה בין 15 ל -50 ימים, תלוי בגודל של המנה להדביק בנגיף, אך בממוצע 28-30 ימים. ברגע בגוף, הפטיטיס וירוס משכפל את בלוטות הלימפה האזוריות, אל הדם ומשם לתאי הכבד וגורם צהבת חריפה דיפוזי המלווה בנגעים של hepatocytes הכבד ותאי reticuloendothelial וירידה פונקציות דטוקסיפיקציה המכשול שלה. נזק hepatocytes לא מתרחשת עקב פעולה ישירה של הנגיף, אלא כתוצאה של מנגנוני immunopathological. התמונה האופיינית ביותר של הפטיטיס A היא צורה מחזורית icteric חריפה: תקופת הדגירה, prodromal (preicteric), צהבת ותקופת החלמה. עם זאת, ב מוקדים של זיהום מגלה מספר גדול של חולים עם צורות תסמינית anicteric של זיהום, מספר אשר המפצה על icteric ( "תופעת הקרחון").

חסינות לאחר זיהום היא חזקה לאורך זמן, נגרמת על ידי נוגדנים נטרול נגיפי ותאי זיכרון החיסון.

אבחון מיקרוביולוגי של הפטיטיס A

אבחון של צהבת A (למעט בעלי חי זיהום - שימפנזים marmozet, בבונים, אשר יש לנו) המבוססים על שיטות אימונולוגיות שונות: שיטת immunofluorescence DGC, דבקה חיסונית hemagglutination (מתחם אנטיגן ויראלי + הנוגדן בנוכחות שלמה שנספחה על אריתרוציטים וגורמת הדבקה שלהם) . עם זאת, תחולתו של שיטות אלה היא מוגבלת עקב חוסר אנטיגנים נגיפיים ספציפיים והתגובה חיסונית קרינה דורש ביופסיות כבדות, אשר אינו רצוי. שיטה אמינה ספציפית היא במיקרוסקופ אלקטרונים חיסוני, אבל זה זמן רב מאוד. לכן, עד שיטה מקובלת רק על התגובה האימונולוגית היא immunosorbent assay שלב מוצק בצורת IPM, או RIM, במיוחד שינוי של "ללכוד" של אימונוגלובולינים M. בארצנו מערכת המבחן המוצע למטרה זו - "DIAG-A-GEO". עקרון העבודה של מערכת בדיקה זו הוא כדלקמן. על קירות הקלקר lunochek sorbed נוגדנים ראשונים אימונוגלובולינים של הכיתה M (M antiimmunoglobuliny) אז מתווסף בסרום החולה נחקר. אם יש IgM בכיתה נוגדנים, הם יוכלו להיקשר נוגדן-טי-M, ואחר כך מוסיפים אותן אנטיגן ויראלי בפרט (הפטיטיס וירוס), אשר מתקבל על ידי גדל בתרבות התא. המערכת היא שטפה, והעתידיות מתווספות נוגדנים אנטי שכותרתו עם peroxidase חזרת. אם כל ארבעת המרכיבים של המערכת אינטראקציה, ארבע שכבת "כריך" מתעוררת:

• antimmogoglobulins M,
• אימונוגלובולינים M (נגד וירוס הפטיטיס A - בסרום הבדיקה של החולה)
• אנטיגן ויראלי,
• נוגדנים אנטי ויראליים עם אנזים.

כדי לאתר את המורכב הזה, המצע עבור האנזים מתווסף את lonettes. תחת השפעת האנזים, הוא נהרס, ומוצר צבעוני נוצר. עוצמת הצבע ניתן למדוד כמותית עם ספקטרופוטומטר או photocolorimeter.

היתרון של שיטת "ללכוד" של IgM היא כי נוגדנים של סוג זה של אימונוגלובולינים מופיעים בתגובה החיסונית העיקרית להצביע על שלב פעיל של זיהום, הם נעלמים לאחר המחלה המועברת . נוגדנים אנטי-ויראליים השייכים למעמד IgG, לעומת זאת, נמשכים זמן רב לאחר המחלה, ומספקים את החסינות הנרכשת. עבור איתור של וירוס הפטיטיס A, שיטת בדיקה DNA מוצע: בדיקה vRNA משלימה משמש בדיקה.

טיפול הפטיטיס A

בשל העובדה כי ייצור אינטרפרון הוא שיבשו הפטיטיס ויראלי, הטיפול הפטיטיס A מבוססת על השימוש של אינטרפרון ו inducer של endogenous סינתזה amixin.

מניעה ספציפית של הפטיטיס A

בעבר בהרחבה מיושם הפטיטיס seroprevention gammaglobulin משתמש בה לא מוצדק, אך הדגש הושם על חיסון ההחזקה, נשא חיסון נגד צהבת. לשם כך מתפתחים גרסאות שונות של חיסונים והם כבר בשימוש. ברוסיה, חיסון יעיל נגד הפטיטיס A הושג בחזרה בשנת 1995, ועכשיו הוא יושם בהצלחה.