תגובת שרשרת פולימראז (PCR) באבחון מחלות זיהומיות

PCR היא אחת משיטות אבחון ה-DNA המאפשרות להגדיל את מספר העותקים של מקטע הגנום (DNA) שזוהה של חיידקים או נגיפים פי מיליונים באמצעות האנזים DNA פולימראז. מקטע חומצת הגרעין הנבדק הספציפי לגנום נתון מוכפל (מוגבר) פעמים רבות, מה שמאפשר לזהותו. ראשית, מולקולת ה-DNA של חיידקים או נגיפים מחולקת לשתי שרשראות על ידי חימום, לאחר מכן, בנוכחות פריימרים של DNA מסונתזים (רצף הנוקלאוטידים ספציפי לגנום הנקבע), הם נקשרים למקטעי DNA משלימים, ושרשרת חומצת הגרעין השנייה מסונתזת לאחר כל פריימר בנוכחות DNA פולימראז תרמו-יציב. מתקבלות שתי מולקולות DNA. התהליך חוזר על עצמו פעמים רבות. מולקולת DNA אחת, כלומר חיידק או חלקיק נגיף אחד, מספיקה לאבחון. הכנסת שלב נוסף לתגובה - סינתזת DNA על מולקולת RNA באמצעות האנזים רוורס טרנסקריפטאז - אפשרה בדיקת נגיפי RNA, כמו נגיף HCV. PCR הוא תהליך בן שלושה שלבים שחוזר על עצמו באופן מחזורי: דנטורציה, חישול פריימרים, סינתזת DNA (פולימריזציה). כמות ה-DNA המסונתזת מזוהה באמצעות ELISA או אלקטרופורזה.

PCR יכול להשתמש בחומרים ביולוגיים שונים - סרום או פלזמה של דם, גירוד שופכה, ביופסיה, נוזל פלאורלי, נוזל מוחי שדרתי וכו'. PCR משמש בעיקר לאבחון מחלות זיהומיות כגון הפטיטיס B נגיפית, הפטיטיס C נגיפית, הפטיטיס D נגיפית, זיהום CMV, זיהומים המועברים במגע מיני (זיבה, כלמידיה, מיקופלזמה, זיהומי אוראפלזמה), שחפת, זיהום HIV וכו'.

היתרון של PCR באבחון מחלות זיהומיות על פני שיטות מחקר אחרות הוא כדלקמן:

• ניתן לזהות את הגורם המדבק בכל סביבה ביולוגית של הגוף, כולל חומר שהתקבל במהלך ביופסיה;
• ניתן לאבחן מחלות זיהומיות בשלבים המוקדמים ביותר של המחלה;
• ניתן להעריך באופן כמותי את תוצאות המחקר (כמה וירוסים או חיידקים נמצאים בחומר הנחקר);
• רגישות גבוהה של השיטה; לדוגמה, רגישות ה-PCR לגילוי DNA של נגיף הפטיטיס B בדם היא 0.001 פיקוגרם/מ"ל (כ-4×102 ^עותקים /מ"ל), בעוד שרגישות שיטת הכלאת ה-DNA באמצעות גלאים מסועפים היא 2.1 פיקוגרם/מ"ל (כ-7×105 ^עותקים /מ"ל).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]