אבחון הרפס

אבחון של הרפס בוסס על התנהלות הפרשת הנגיף הקלסית בתרביות תאים רגישים, immunofluorescence ושיטות סרולוגיות, ביצוע מחקרי colposcopic בשיטות מולקולריות-ביולוגיות מודרניות (PCR, כלת dot), אשר מאפשר לך לבצע ניתוח של כל הקבוצה ההרפס, כולל HHV-6 ו- HHV-7 סוגים.

שיטות לאבחון מעבדה של זיהום הרפטית

השיטות העיקריות שמטרתן להפריש HSV או גילוי חלקיקים נגיפיים ו / או המרכיבים שלהם	שיטות עזר שמטרתן גילוי נוגדנים ל- HSV בנוזלים ביולוגיים של הגוף האנושי
בידוד של HSV בתרבויות רגישות של תאים ובעלי חיים ישיר ו immunune אלקטרונים מיקרוסקופית אפשרויות MFA ישירות ועקיפות IFA שיטות ביולוגיות מולקולריות לטקס התגובה התלכדות	תגובת ניטרול RSK קביעת נוגדנים שאינם חלבונים מבניים של HSV-1,2

זה מראה כי 76% מהחולים יש הרפס גניטלי (GH) הנגרמת על ידי HSV-2, ו ב 24% - HSV-1 סוג. ו GG כמו monoinfection רק התרחשה 22% מהחולים, ב 78% מהמקרים, אגודות מיקרוביאלית זוהו. ב 46% מהחולים, parasitocenosis נגרמת על ידי שני פתוגנים זוהה, כולל chlamydia התגלו ב 40% מהמקרים. לעתים רחוקות את המריחות נקבע gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

ב 27% מהחולים, parasitocenosis היה מיוצג על ידי שלושה, ו -5.2% על ידי ארבעה פתוגנים. לעתים קרובות יותר היה שילוב של chlamydia עם Gardnerella ו קנדידה פטריות. נתונים אלה מצדיקים את צורך בדיקה בקטריולוגית יסודית של YY למטופלים לזהות את שילובי סוכן פתוגניים, כמו גם לימוד מעמיק של בפתוגנזה של דלקות מעורבות בדרכי השתן ואברי המין, אשר תאפשרנה טיפול מורכב נבדל של זיהום HSV.

חומרים שיש ללמוד בבידוד של HSV בהתאם לוקליזציה של נגעים herpetic

לוקליזציה של נגעים	תוכן שלפוחית	שריטות סלולריות				SDC	לשאוב מן הסמפונות	Bioptat	דם
		1	2	3	4
עור	+								+
עיניים			+						+
גניטליה				+					+
פי הטבעת	+				+				+
פה	+	+							+
CNS	+					+		+	+
קל		+					+		+
הכבד								+	+
הרפס מולד	+	+	+				+		+

שיטות לאבחון מעבדה של זיהום ציטומגלווירוס

שיטות	הזמן הנדרש כדי לקבל תוצאות	הערות
VIRUSOLOGICAL
מיקרוסקופית אלקטרונים	3 שעות	חבטות
בידוד של הנגיף בתרבית תאים (CPD)	4-20 ימים	רגיל, איטי
מכתים Immunofluorescent של AH מוקדם עם נוגדנים חד שבטיים	6 שעות	פחות ספציפי
CYTOLOGICAL	2-3 שעות	פחות ספציפי
סיאולוגי
RSK	2 ימים	סטנדארט
Ssubsistence	יום אחד	עבודה
ריף	6 שעות	פשוט, ספציפי
NFIF	6 שעות	מסובך
RIMF	6 שעות	מסובך
IFA (IgM, TO)	6 שעות	מהיר, פשוט
אימונובלות	6 שעות	יקר
מולקולרי-ביולוגי
MG	5-7 ימים	יקר, זמן רב
PCR	3 שעות	יקר

שיטות לאבחון וירוס הרפס זוסטר

שיטות אבחון	טכניקות מעבדה
עקיפות
הקצאה	תרבות בד, עוף עוברים, חיות מעבדה, שיתוף עם גידול תאים מתירניים או וירוסים עוזר
זיהוי של מבודדים	תגובת ניטרול, DSC, IF, IPPE, תגובה של מבודד משקעים, התלכדות, IF
ישיר
ציטולוגיה	מרחקים: צבע immunofluorescence
היסטולוגיה	Pathomorphology של התא
מבנה	מיקרוסקופיה עובריים, מיקרוסקופיה אימונואלקטרונית
קביעת אנטיגנים	IF, PIÉF, RIM, IFA
קביעת ייצור מקומי של נוגדנים	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
גישות ביולוגיות מולקולריות	הכלאה מולקולרית, PCR

אבחון מעבדה של זיהום הנגרמת על ידי וירוס הרפס זוסטר

בעיות אבחון	שיטות	תוצאות צפויות
זיהום ראשוני חריף	1	איתור לאחר 2 שעות
	2	רמת נוגדנים גדל לאט
	3	הווה 3 ימים לאחר ההדבקה
זיהום חוזר אקוטית	1	איתור של ULV ב 2 שעות
	2	רמת נוגדנים גדל לאט
	4	הווה 4 ימים לאחר הופעת הפריחות

1. הקביעה בנוזל שלפוחית של WIEF;
2. serology: DSC, ELISA, שמטרתה לזהות
3. serology: ELISA, שמטרתה גילוי IgM;
4. serology: ELISA, שמטרתה גילוי IgA, IgM.

שיטות להצביע על התגובה החיסונית של זיהום עקב וירוס הרפס זוסטר

גישה	שיטה
איתור של titer נוגדנים מוגברת בסרה השנייה	RSK, RTGA, RPGA, תגובה נטרול IF, RIM, ELISA
איתור של Ig G, Ig נוגדנים ספציפיים למחלקה במדגם הסרום הראשון	IFA, IF, RIM, לטקס-התלכדות

פרשנות של תוצאות בדיקה סרולוגית של sera החולה על זיהומים herpesvirus (ELISA)

שם הזיהום / הסמן	סף ממוצע לזיהומים
	תוצאות ניתוח	פרשנות
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	חיובי 1-6 חיובי 6-10 חיובי> 10 שלילי חיובי 100-300 שלילי <90 ספק 90-100	רמיסיה החמרה של המחלה שלב אקוטי של המחלה אין דלקת (מחלה) שלב חריף של המחלה חזור על הניתוח לאחר 2-3 שבועות
הרפס פשוט 1,2 סרוטיפים אנטי HSV 1/2 סך הכל. (100-900%)	חיובי 100-400 חיובי 400-800 חיובי> 800 שלילי <100	רמיסיה החמרה של המחלה שלב אקוטי של המחלה אין דלקת (מחלה)

הטבלה מציגה את השיטות העיקריות של אבחון מעבדה של זיהומים הרפס, וכן ממליץ על חומרים ביולוגיים שנבדקו לבידוד של HSV, תוך התחשבות לוקליזציה של נגעים herpetic

אמין הוא הקצאת הרפס סימפלקס CMV באמצעות זיהום של תרבויות תאים רגישים. כך, בבדיקות וירולוגיות של 26 חולים בתקופה של הישנות, HSV היה מבודד על תרבות ור רגיש בתאים 23 מקרים (88.4%). בתרבויות נגועות, נצפתה תבנית של פעילות ציטופטית האופיינית ל- HSV - היווצרותם של תאים ענקיים רב-גרעיניים או הצטברות של תאים מעוגלים ומורחבים בצורת חבורות. ב -52.1% מהמקרים ניתן היה לזהות מוקדי אפקט ציטופטי של הנגיף ב -16-24 שעות לאחר ההדבקה. על ידי 48-72 שעות של הדגירה של תרבויות נגוע, אחוז החומרים שגורם הרס תאים ספציפיים עלה ל 87%. ורק ב 13% מהמקרים, תוצאות חיוביות זוהו 96 שעות לאחר ההדבקה ועוד, או עם מעבר חוזר.

שיטות לאבחון מעבדה של זיהום הרפס כללי

השיטות העיקריות שמטרתן איתור (בידוד) של herpesviruses, חלקיקים שלהם ואת מרכיביו	שיטות עזר שמטרתן גילוי נוגדנים לוירוסים הרפס בנוזלים ביולוגיים, גילוי משמרות אנזימטיות בסרום הדם
בידוד של וירוס הרפס על תרביות תאים רגישות ובעלי החיים במיקרוסקופ אלקטרונים ישירים ו חיסוני שיטת אימונו הישיר ועקיף התגלמויות ישירות ואפשרויות טכניקת נוגדן פלורסנט עקיפות אפשרויות ELISA התגלמויות המולקולרית (DNA-DNA) וכלת תגובת שרשרת פולימראז התלכדות לטקס תגובה	נטרול שלמת תגובת קיבוע התלכדות לטכס תגובה עקיף פלורסנט נוגדני שיטת התגלמות עקיף אימונו שיטה וריאנט התגלמויות ELISA שיטת חיסון סופג רדיאלי קיבוע של שיטת השלמת קביעת אלאנין ו aspartate הרמות

כדי לאבחן זיהום מונונוקלאזיס זיהומי (זיהום הנגרם על ידי VEB), שיטות סרולוגיות משמשים. התגובה של פול Bunnel עם אריתרוציטים של איל, אבחון tich של 1:28 ומעלה עם מחקר בודד של סרום, או עלייה פי 4 נוגדנים בבדיקת סרה זוג. השתמש תגובה גוף- Bauer עם השעיה של 4% תאי דם אדומים רשמיים של הסוס. התוצאה נלקחת בחשבון לאחר 2 דקות, עם mononucleosis זיהומיות התגובה היא ספציפית מאוד.

נכון לעכשיו, אנזים immunosassay (ELISA) הוא פיתח כדי לאבחן mononucleosis זיהומיות. במקרה זה, IgG ו IgM נוגדנים בסרום של המטופל נקבעים על ידי דוגרים אותו עם לימפובלסטים נגוע EBV, ואחריו טיפול עם נוגדנים פלואורסצנטיים. בתקופה החריפה של המחלה, נוגדנים לאנטיגן הקפסיד הנגיפי נקבעים בטיטר של 1: 160 ומעלה.

בעת שימוש במספר מערכות בדיקה המסחריות מיובאי IFA יכול לזהות: נוגדני נוגדני מעטפת נמלת איגן EBV לאנטיגן מוקדם של EBV, הנוגדן הכוללת לאנטיגן מוקדם של EBV, נקבע בשלב החריף של המחלה ואת בגרעין בציטופלסמה, ואת הנוגדנים המוגבלים EBV מוקדם, נקבע בשלב החריף של המחלה ואת בגרעין בציטופלסמה של תאים, מתוחם נוגדנים לאנטיגן מוקדם EBV, נקבע בעיצומה של המחלה רק בציטופלסמה של תאים, ו נוגדנים לאנטיגן גרעיני EBV. השימוש במערכות בדיקה אלה מאפשר אבחנה דיפרנציאלית של מספר מחלות הקשורות ל- EBV.

לאחר ELISA חיובית לזיהוי נוגדנים EBV לתת מענה המאשר immunoblot, אשר לזהות נוכחות של נוגדנים להפריד חלבונים סמן EBV (p-חלבונים): P23, P54, P72 (בנוכחות החלבון מעלה את האפשרות של רבייה EBV), עמ '138. סעיד שיטות מעבדה לעיל משמשים כדי לשלוט על האפקטיביות של הטיפול.

הרגישות של שיטות וירולוגיות הוא 85-100%, הספציפיות היא 100%, זמן המחקר הוא 2-5 ימים. לעתים קרובות בפועל, השיטה של immunofluorescence ישיר (PIF) עם נוגדנים polyclonal או monoclonal נגד HSV-1 ו HSV-2 משמש. שיטת UIF ניתן לשכפל בקלות במעבדה קלינית קונבנציונלית, זה לא יקר, הרגישות היא מעל 80%, הספציפיות היא 90-95%. על ידי מיקרוסקופ immunofluorescent חשף את נוכחותם של תכלילים ציטופלסמית, תכונות מורפולוגיות, באחוז התאים הנגועים מריחות, שריטות השופכה, תעלת צוואר הרחם, צוואר הרחם, פי הטבעת.

שיטת UIF נותן מושג על תכונות מורפולוגיות של תאים ושינויים לוקליזציה של אנטיגנים HSV. בנוסף לסימנים הישירים של נזק לתאים על ידי וירוסים הרפס (זיהוי של הארה ספציפית), יש סימנים עקיפים של זיהום הרפטית על פי נתוני UIF:

• צבירה של חומר גרעיני, פילינג של karyoolma;
• נוכחות של מה שנקרא. גרעיני "חורים", כאשר רק אחד karyolemma נשאר גרעין התא;
• נוכחות של תכלילים intranuclear - עגל של Caudry.

בעת הגדרת רופא UIF מקבלת לא רק איכות, אלא גם הערכה כמותית של התאים הנגועים שאנחנו שמשנו להעריך את היעילות של טיפול אנטי-ויראלי עם אציקלוביר (AC). כך, 80 חולים עם הרפס גניטלי פשוט (GG) נבדקו בשיטת ה- UIF בדינמיקה. הוא הוכיח כי אם, לפני טיפול עם אציקלוביר ב מריח 88% מחולים היו אחוז גבוה של תאים נגועים (50-75% ומעלה), אחרי קורס אחד של אציקלוביר ב מריח 44% מחולים עם תאים בריאים זוהו 31% ממקרים מסומנים תאים נגועים פרט 25% מהחולים היו עד 10% של תאים נגועים.

התוכן של תאים נגועים במכות (תגובה PIF) של חולים עם הרפס גניטלי, שטופלו עם Acyclovir

תקופות מחלה	אחוז באחוזים
	תאים נגועים					תאים נורמליים
	יותר מ 75%	50-75%	40-50%	10%	תאים בודדים ב- n / sp
הישנות (לפני הטיפול)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
הפוגה (לאחר הטיפול)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

באמצעות שנים רבות של UIF ואת שיטת dot-hybridization, כמעט 100% מהמקרים בקנה אחד עם תוצאות המחקר. יצוין כי על מנת להגביר את האמינות של אבחנה של GH, במיוחד במקרים בהם יש תת-קלינית וצורות malomanifestnyh של הרפס, מומלץ להשתמש בשיטת 2-3 האבחון במעבדה, במיוחד כאשר בוחנים נשים בהריון, נשים עם היסטוריה מיילדותיים מעוטי יכולת, אנשים עם אבחנה גניקולוגית מוגדר.

לפיכך, לצורך אבחון PCR של זיהומים נגיפיים וחיידקיים בדרכי השתן ואברי המין יש צורך להעריך את התוצאות החיוביות שהושגו עם ההיסטוריה, נוכחות (או העדרו) של תסמינים קליניים ספציפיים. אם chlamydia מזוהה עם PCR, אז במקרה זה אפשר לדבר על זיהום ולפתור את הבעיות של הטיפול בהתאם. במקרה של זיהוי של mycoplasmas (ureaplasmas) הנם פתוגנים אופורטוניסטיים, כדי לאשר את האבחנה נדרשת לבצע מחקרים נוספים בתרבות, t. חומר יבול א מחולה רגישה תרביות תאים. רק כאשר תוצאות חיוביות מתקבלים בניתוח התרבות אנחנו יכולים לדבר על אישור מעבדה של אבחון של mycoplasmosis. שיטה זו תאפשר, אם יש צורך, כדי לקבוע את הרגישות של mycoplasmas מבודדים לצורות מרפא בשימוש תכוף (אנטיביוטיקה, fluoroquinolones, וכו ').

אולי זיהום של שלב אחד עם כמה וירוסים של המשפחה Nepresviridae. לעתים קרובות זיהינו זיהום של חולה אחד עם HSV-1, HSV-2 ו- CMV וירוסים. הרבה יותר נגועים במספר נגיפי הרפס היו חולים עם ביטויים קליניים ומעבדה של IDS משניים (מטופלים עם אונקואטמולוגי, אונקולוגי, נגוע ב- HIV). לפיכך, עולה כי הפרעות קליניות ואימונולוגיות המתקדמות בזיהום ב- HIV מלוות בגידול במספר הרפסוירוסים שזוהו ע"י הכלאה מולקולארית. זה משמעותי ביותר מבחינה פרוגנוסטית יכול להיחשב מורכבת בשלב אחד של זיהוי DNA של HSV-1, CMV ו HHV-6 סוג.

[1], [2], [3]