ויטמין A בדם

ערכי ייחוס (נורמה) לריכוז ויטמין A (רטינול) בסרום הדם: בילדים בגילאי 1-6 שנים - 0.7-1.5 מיקרומול/ליטר, בגילאי 7-12 שנים - 0.91-1.71 מיקרומול/ליטר, בגילאי 13-19 שנים - 0.91-2.51 מיקרומול/ליטר; במבוגרים - 1.05-2.09 מיקרומול/ליטר.

ויטמין A הוא ויטמין מסיס בשומן וקיים בשתי צורות: ויטמין A עצמו, או רטינול (נמצא רק במוצרים מן החי), ופרו-ויטמין A, המכונה קרוטן (המתקבל ממוצרים מן החי ומוצרים מן הצומח), אשר ניתן להמיר לרטינול בדפנות מערכת העיכול. כ-50-90% מהרטינול התזונתי נספג במעי הדק ומועבר בקומפלקס הקשור לכילומיקרונים לכבד, שם הוא מאוחסן כרטינול פלמיטט. בעת הצורך, הוא משתחרר לזרם הדם כרטינול המקושר עם חלבון קושר ויטמין A. בסרום הדם, קומפלקס החלבון הקושר ויטמין A + רטינול נקשר לטרנסתירטין. מהסרום הדם, רטינול נקלט על ידי תאי מטרה, כגון קולטני האור של הרשתית והאפיתל.

כאשר הגוף מקבל ויטמין A בכמויות העולות על הנדרש (180-430 מק"ג רטינול ליום, בהתאם לגיל, מין ומצב פיזיולוגי), עודפו מצטבר בכבד ויוצר מחסן של ויטמין זה. כאשר צריכת הרטינול עם מזון מצטמצמת, עתודותיו מהכבד משתחררות לזרם הדם, מה ששומר על ריכוז הרטינול בסרום הדם ברמה תקינה (מעל 0.7 מיקרומול/ליטר). צורות פעילות ביולוגית אחרות של ויטמין A (חומצה רטינולית וחומצה רטינואית) נמצאות בדם בריכוזים נמוכים מאוד (מתחת ל-0.35 מיקרומול/ליטר); אסטרים של רטינול מהווים כ-5% מסך ויטמין A (0.1-0.17 מיקרומול/ליטר).

ויטמין A ממלא תפקיד חשוב בתהליכי חמצון-חיזור. רטינול מקדם את היווצרות הגליקוגן בכבד ובשרירים, מסייע בהעלאת תכולת הכולסטרול בדם, ומשתתף בסינתזה של הורמוני סטרואידים והורמוני מין. הוא הכרחי לגדילה והיווצרות של מערכת השלד, לסינתזה מחדש של רודופסין, וגם מקדם את התפקוד התקין של הריריות והאפיתל העטוף של העור, ומונע מטפלזיה, היפרקרטוזיס ונשירת עור מוגזמת. ויטמין A מסייע בחיזוק השיער, השיניים והחניכיים. בשנים האחרונות הוכח תפקידו המגוון של ויטמין A במניעת סרטן ובוויסות חסינות (הוא הכרחי להשלמת פגוציטוזה, מגביר את סינתזת Ig, מגרה את היווצרותם של הורמוני T, מגרה נוגדי T מסוג II וכו'). ויטמין A הוא נוגד חמצון פעיל, הפועל בעיקר בנוכחות ויטמין E; הוא מגן על ויטמין C מפני חמצון. מחסור בוויטמין A נחשב לגורם סיכון לגידולים ממאירים. מחקרים ניסויים הראו כי הגדלת תכולת ויטמין A בתזונה מגדילה את תוחלת החיים החציונית ב-17.5%. אבץ הוא קו-גורם חיוני במטבוליזם של ויטמין A (הכרחי לסינתזה של חלבון הקושר ויטמין A).

הדרישה היומית הממוצעת לרטינול למבוגרים (20-50 שנים) היא 1.2 מ"ג (4000 יחב"ל, 1 יחב"ל שווה ערך ל-0.3 מק"ג רטינול), לנשים בהריון - 1.5 מ"ג (5000 יחב"ל), לנשים מניקות - 1.8 מ"ג (6000 יחב"ל), ולאנשים מעל גיל 60 - 2.5 מ"ג (10,000 יחב"ל). לפחות שליש מהדרישה היומית לרטינול צריכה להגיע לגוף בצורה מוגמרת; את השאר ניתן לכסות על ידי צריכת קרוטנואידים, מהם נוצר רטינול בגוף. יש לקחת בחשבון שכ-30% מהרטינול במוצרי מזון נהרס במהלך טיפול בחום. פעילות הרטינול גבוהה פי 2 מזו של קרוטן, בנוסף, רק 30-40% ממנו נספגים במעי. לכן, כאשר מעריכים את התזונה, ההנחה היא ש-1 מ"ג של רטינול שווה ערך ל-6 מ"ג של קרוטנואידים.

קביעת רטינול (ויטמין A) וקרוטנואידים בסרום הדם לפי בסי כפי ששונה על ידי ל.א. אניסימובה

עקרון השיטה

קביעת ויטמין A וקרוטנואידים מבוססת על הידרוליזה שלהם בתמיסת אלכוהול בסיסית ולאחר מכן מיצוי עם תערובת של ממסים אורגניים.

ריאגנטים

• תמיסת אשלגן הידרוקסיד (KOH) 11 M.
• 96% אלכוהול אתילי.
• תמיסת אשלגן הידרוקסיד (KOH) 1 M באלכוהול אתילי 96%: נפח אחד של תמיסת KOH 11 M מעורבב עם 10 נפחים של אלכוהול אתילי 96%. הריאגנט מוכן ביום המחקר. אם מתרחשת צביעה במהלך הערבוב, יש לטהר את האלכוהול באמצעות זיקוק לפני השימוש.
• קסילן, טהור כימית
• אוקטן, טהור כימית
• תערובת קסילן-אוקטן: מוכנה על ידי ערבוב כמויות שוות של קסילן ואוקטן.

המחקרים מבוצעים באמצעות ספקטרופוטומטר.

תהליך קביעת ויטמין A

דם שנלקח מהאצבע (כ-1 מ"ל) מוכנס למבחנה צנטריפוגה ומוכנס לכוס זכוכית עם מים חמים (טמפרטורה 40-45 מעלות צלזיוס) למשך 20-30 דקות. כדי להפריד את הסרום, קריש הדם נשאב בזהירות מסביב לקצה דפנות המבחנה בעזרת מוט זכוכית דק וצנטריפוגה במהירות של 3000 סל"ד למשך 10 דקות.

נאספים 0.12 מ"ל של סרום ומועברים למבחנה אגגלוטינציה, שם מוסיפים 0.12 מ"ל של תמיסת אלכוהול אשלגן הידרוקסיד 1 M. התכולה מנענעת היטב.

מבחנות עם דגימות מונחות באמבט מים למשך 20 דקות בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס לביצוע הידרוליזה.

הדגימות מקוררות, מוסיפים להן 0.12 מ"ל של תערובת קסילן-אוקטן, מטלטלות במרץ במשך 10-15 שניות. הן מקוררות שוב וצנטריפוגות.

השכבה העליונה המכילה ויטמין A וקרוטנואידים מוסרת בזהירות באמצעות פיפטה פסטר עם נורת גומי ומועברת למיקרו-קובטות.

הדגימות עוברות ספקטרופוטומטריה באורך גל של 328 ננומטר כדי לקבוע ויטמין A, ובאורך גל של 460 ננומטר כדי לקבוע קרוטנואידים.

לאחר ספקטרופוטומטריה, הדגימות נחשפות לקרינה אולטרה סגולה כדי להרוס ויטמין A. לשם כך, מותקנת מנורת קוורץ (קוטלת חיידקים) במרחק של 15-20 ס"מ מהמיקרו-קובטות כך שהחלק של הקובטה המלא בנוזל חשוף לקרינה; זמן ההקרנה הוא 45-60 דקות.

הדגימות עוברות ספקטרופוטומטריה חוזרת באורך גל של 328 ננומטר. תכולת ויטמין A נקבעת על ידי ההפרש בערכי ההכחדה (צפיפות אופטית) תוך התחשבות במקדם (גורם) 637 שחישב בסי עבור ויטמין A.

החישוב מתבצע לפי הנוסחה:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

כאשר X הוא תכולת ויטמין A, μg/dl; 637 הוא המקדם המחושב על ידי בסי לקביעת ויטמין A; E328(1) היא הצפיפות האופטית של התמיסה לפני הקרנה; E328(2) היא הצפיפות האופטית של התמיסה לאחר הקרנה.

המקדם להמרת ריכוז ויטמין A מ-µg/dL ל-µmol/L הוא 0.035.

תכולת הקרוטנואידים מחושבת לפי הנוסחה:

X = 480-E480,

כאשר X הוא תכולת הקרוטנואידים, μg/dl; 480 הוא המקדם המחושב על ידי Bessey לקביעת קרוטנואידים; E480 היא הצפיפות האופטית של תמיסת הבדיקה.

פֶּתֶק

לדברי בסי, ניתן להשתמש בנפח גדול או קטן יותר של סרום בעת ביצוע מחקר, אך היחס שלו לנפח תמיסת האלכוהול חייב להיות קבוע עם כל שינוי בנפח (כמות) של תערובת הקסילן-אוקטן.

התכולה התקינה של ויטמין A בסרום הדם היא: אצל יילודים ותינוקות - 160-270 מיקרוגרם/ליטר; אצל מבוגרים - 1.05-2.45 מיקרומול/ליטר (300-700 מיקרוגרם/ליטר). תכולת הקרוטנואידים בסרום הדם של מבוגרים היא 800-2300 מיקרוגרם/ליטר.