קריוטיפיזציה

לרוב משתמשים בתרביות דם לטווח קצר, תאי מח עצם ותרביות פיברובלסטים לחקר כרומוזומים. דם עם נוגד קרישה המועבר למעבדה עובר צנטריפוגה כדי להשקיע את תאי הדם האדומות, והלויקוציטים מודגרים במדיום תרבית למשך 2-3 ימים. פיטומהמגלוטינין מתווסף לדגימת הדם, מכיוון שהוא מאיץ את הצטברות התאים האדומות וממריץ את חלוקת הלימפוציטים. השלב המתאים ביותר לחקר כרומוזומים הוא המטאפאזה של מיטוזה, ולכן משתמשים בקולכיצין כדי לעצור את חלוקת הלימפוציטים בשלב זה. הוספת תרופה זו לתרבית מובילה לעלייה בשיעור התאים במטאפאזה, כלומר, בשלב מחזור התא שבו הכרומוזומים נראים לעין ביותר. כל כרומוזום משכפל (מייצר עותק משלו) ולאחר צביעה מתאימה, נראה כשתי כרומטידות המחוברות לצנטרומר, או להיצרות המרכזית. לאחר מכן מטופלים התאים בתמיסת נתרן כלורי היפוטונית, מקובעים ונצבעים.

לצביעת כרומוזומים משתמשים לרוב בצבע רומנובסקי-גימזה, אצטרמין 2% או אצטרסאין 2%. הם צובעים את הכרומוזומים במלואם ובאופן שווה (שיטה שגרתית) וניתן להשתמש בהם לגילוי אנומליות מספריות בכרומוזומים אנושיים.

כדי לקבל תמונה מפורטת של מבנה הכרומוזום, לזהות (להגדיר) כרומוזומים בודדים או את מקטעיהם, נעשה שימוש בשיטות שונות של צביעה דיפרנציאלית. השיטות הנפוצות ביותר הן ג'ימזה, כמו גם פסים מסוג G ו-Q. בבדיקת מיקרוסקופיית ההכנה לאורך הכרומוזום, מתגלים מספר פסים צבועים (הטרוכרומטין) ולא צבועים (אאוכרומטין). אופי הפסים הרוחביים המתקבלים בדרך זו מאפשרים לזהות כל כרומוזום בקבוצה, מכיוון שחילוף הפסים וגודלם הם אינדיבידואליים וקבועים לחלוטין עבור כל זוג.

לוחות המטאפאזה של תאים בודדים מצולמים. כרומוזומים בודדים נחתכים מהתצלומים ומודבקים לפי הסדר על דף נייר; תמונה זו של כרומוזומים נקראת קריוטיפ.

השימוש בצביעה נוספת, כמו גם שיטות חדשות להשגת תכשירים כרומוזומליים המאפשרים מתיחה של כרומוזומים באורך, מגבירים משמעותית את דיוק האבחון הציטוגנטי.

פותחה נומנקלטורה מיוחדת לתיאור הקריוטיפ האנושי. הקריוטיפ התקין של גבר ואישה מסומן כ-46, XY ו-46, XX, בהתאמה. בתסמונת דאון, המאופיינת בנוכחות כרומוזום נוסף 21 (טריזומיה 21), הקריוטיפ של אישה מתואר כ-47, XX 21+, ושל גבר הוא 47, XY, 21+. בנוכחות אנומליה מבנית של הכרומוזום, יש צורך לציין את הזרוע הארוכה או הקצרה השתנו: האות p מציינת את הזרוע הקצרה, q מציינת את הזרוע הארוכה, ו-t מציינת את הטרנסלוקציה. לכן, במקרה של מחיקה של הזרוע הקצרה של כרומוזום 5 (תסמונת cri du chat), הקריוטיפ הנשי מתואר כ-46, XX, 5p-. לאם של ילד עם תסמונת דאון טרנסלוקציה, נשאית של טרנסלוקציה מאוזנת 14/21, יש קריוטיפ של 45, XX, t(14q; 21q). כרומוזום הטרנסלוקציה נוצר על ידי איחוי הזרועות הארוכות של כרומוזומים 14 ו-21, והזרועות הקצרות אובדות.

כל זרוע מחולקת לאזורים, אשר בתורם מחולקים למקטעים, ששניהם מסומנים בספרות ערביות. הצנטרומר של הכרומוזום הוא נקודת ההתחלה לספירת אזורים ומקטעים.

לפיכך, ארבע תוויות משמשות לטופוגרפיה של כרומוזומים: מספר כרומוזום, סמל זרוע, מספר אזור ומספר מקטע בתוך האזור. לדוגמה, הערך 6p21.3 פירושו שאנו מדברים על כרומוזום 6 של הזוג השישי, הזרוע הקצרה שלו, אזור 21, מקטע 3. ישנם גם סמלים נוספים, בפרט pter - קצה הזרוע הקצרה, qter - קצה הזרוע הארוכה.

שיטת המחקר הציטוגנטית מאפשרת גילוי של מחיקות ושינויים אחרים בכרומוזומים בלבד בגודל של כמיליון בסיסים (נוקלאוטידים).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]